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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » Taq酶PCR的问题
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生化道长

至尊木虫 (知名作家)

[求助] Taq酶PCR的问题

请问各位大侠，用Taq酶对1.3KB的基因进行PCR，出错的可能性有多大？
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1楼 2012-04-01 10:23:37
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超然渡陈

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 金币+1, 欢迎交流~头像不错^_^ 2012-04-03 15:07:15
生化道长: 金币+1, ★★★很有帮助 2012-04-03 15:52:51
GC含量不是很高的话用LA Taq就行了。我扩过1500 bp的，第一次构建送公司测序有一个位点突变。第二次从同一个平板上挑了另外两个去测序，都没有突变。
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5楼2012-04-03 10:57:23
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gongeleven

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
生化道长: 金币+1, ★★★很有帮助, Thanks 2012-04-01 10:37:08
这个看序列，也有运气。不过正常情况下做克隆用taq酶是可以的
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2楼2012-04-01 10:29:13
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highjmq

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
生化道长: 金币+3, ★★★很有帮助, Thanks 2012-04-01 10:37:59
生化道长: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-04-01 10:51:21
西瓜: 金币+2, 鼓励应助 2012-04-01 17:44:41
1.3KB的话如果用taq酶不会有太大问题。lataq比较适合长片段，extaq效率比较高，puf可以有很高的保真性，一般来说如果做克隆，不是太难批的片段（引物结构较少，长度适中,1-2.5kb之间），taq没什么问题的，注意割胶时候紫外不要照太久，这步突变几率较高。还有不同实验室的时候有时候会发生自发的品系基因突变，这个可以用多次测序来判断。
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3楼2012-04-01 10:34:34
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hyacinth326

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
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西瓜: 金币+1, 鼓励交流 2012-04-01 18:01:54
生化道长: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-04-02 12:10:20
rTaq出错率高一些，exTaq要好一些，平均1000个碱基里有一个吧，1.3kb用exTaq还是可以的
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4楼2012-04-01 12:58:46
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