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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 嵌套PCR引物如何设计？目的片段434bp
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sxxuan

金虫 (著名写手)

[求助] 嵌套PCR引物如何设计？目的片段434bp

最近要自己设计引物拼接一段序列，全长434bp，是不是要合成若干对重叠的引物进行扩增？没接触过这方面的实验，请大家帮忙呀～
GACAAGGAAGATGCAGCTAGTGGCTGAATGGAGTGGCTGTGTGGAGTGGCACCCAGAACTGATGAATGAAGGTGGAGAGGTGAGCCTGCGGGTCCGGCAGGACTCAATGGGAAACTTCCACCTGACAGAGCTTGAGAAAGAGGAGAGAGTGATGGCTTTCTGGCTGCTGGCAGGACTAGCGGCTTCGGCCTTCCACTGGTCCGGCATCCTTGGTGTGATGGGATTGTGGACGCTGTCGGAAATGCTGAGGAGCTCAATAATCTAAACCCAGACTGTGACAGAGCAAAACCCGGAGGGCTCGTAAAAGATTGTCCGGAACCAAAAGAAAAGCAAGTAACTCACATAGATAGAGCTCGGACTGGAGAGCTCTTTAAACAAAAAAGCCAGAATTGAGCTGAACCTGGAGAGCTCATTAAACATAGTCCAGACAAAAC
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你的日子如何，你的力量也必如何！
1楼 2012-03-31 16:34:51
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sxxuan

金虫 (著名写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by lvbobo823 at 2012-04-02 17:36:22:
没有模板，你可以让公司合成一下，估计DNA片段每个碱基3块左右，合成下来一千多块。用引物不好弄。

是啊，扩了几次都不行。估计我老板不同意让公司合成的
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你的日子如何，你的力量也必如何！
5楼2012-04-02 20:22:40
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lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 金币+2, 鼓励应助 2012-04-01 17:34:44
嵌套PCR就是巢式PCR，如果是巢式PCR就是第一轮PCR扩增选用最外围的引物，回收预期大小目的片段后，在通过一轮靠内的引物扩增若第二轮产物也出现预期的大小可以断定你所获得的片段就是目的片段。 你所说的拼接一段序列，全长434bp我不太明白是啥意思？
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hehe
2楼2012-04-01 08:39:56
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sxxuan

金虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by lvbobo823 at 2012-04-01 08:39:56:
嵌套PCR就是巢式PCR，如果是巢式PCR就是第一轮PCR扩增选用最外围的引物，回收预期大小目的片段后，在通过一轮靠内的引物扩增若第二轮产物也出现预期的大小可以断定你所获得的片段就是目的片段。 你所说的拼接一段 ...

是不是我理解错了嵌套PCR？其实是我要得到全长434bp的序列，但没有模板，要设计若干对引物，把这段序列拼接出来。谢谢
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你的日子如何，你的力量也必如何！
3楼2012-04-01 09:22:53
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lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ...
sxxuan: 金币+100, ★有帮助 2012-04-05 09:07:33
没有模板，你可以让公司合成一下，估计DNA片段每个碱基3块左右，合成下来一千多块。用引物不好弄。
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hehe
4楼2012-04-02 17:36:22
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