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多拷贝转化子的青霉素双层平板 透明圈筛选问题
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请教下各位，最近做了酿酒酵母转化，转化后用G418抗性筛选，然后用青霉素双层平板筛选多拷贝的转化子（载体上含有Amp+），就是青霉素酶活力测定：参照Chevallier MR 方法（见附件[attach]90528[/attach]）进行。原理：转化子中Amp 基因表达产生的青霉素酶水解青霉素可产生还原性的青霉素噻唑酸，该酸可以使碘-淀粉复合物脱色，因此转化子可以在含有碘-淀粉的固体平板上形成透明圈．青霉素酶量越大形成的透明圈越大，表明拷贝数越高。步骤如下图。但我加氨苄青霉素到试剂中时，碘液就褪色了，后面加到淀粉培养基中就不会变蓝。就是说Amp也能使碘-淀粉复合物脱色。那不就整个平板都会褪色，就看不到透明圈？不知道我哪里出错了，望指教。 |
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本内容由用户自主发布，如果其内容涉及到知识产权问题，其责任在于用户本人，如对版权有异议，请联系邮箱：xiaomuchong@tal.com - 附件 1 : 青霉素透明圈法.PDF
2012-03-30 23:15:59, 185.91 K
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