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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 【求助/交流】请问我挑平板上的单菌斑直接做pcr可以吗
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melinda2010

新虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】请问我挑平板上的单菌斑直接做pcr可以吗 已有10人参与

因为是自养菌长的不是很旺盛，所以直接挑单菌斑做可以吗？会不会出现假阳性？谢谢
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1楼 2010-11-24 11:01:43
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xplc

金虫 (小有名气)
★ ★
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lstt09nk(金币+1):鼓励交流 2010-11-24 13:14:36
colony PCR直接挑的单菌落做的啊

引物特异的话，不大会有假阳性；再说了，就算有假阳性，一第二轮筛选也容易多了啊
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2楼2010-11-24 11:29:53
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skkyy88888

铜虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
最好是用10ul培养基稀释下。然后去2ul当模板，其余8ul接种。
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3楼2010-11-24 13:10:36
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piaopiao233

金虫 (小有名气)
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dhd997(金币+2):谢谢交流 2010-11-24 14:22:21
可以的
我试过了
我们一般用竹签在单菌落上点一下，然后加到PCR体系里沾沾。然后进行PCR

假阳性是有可能的，但是你会省很多工作
因为没有PCR产物的，根本不需要进行了下一步操作了

还有，竹签挑完可以再在液体培养上接种一下，这样比较省时间。对的就接着处理，错的就直接扔了

[ Last edited by piaopiao233 on 2010-11-24 at 13:58 ]
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4楼2010-11-24 13:57:18
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lixg

铁杆木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
同意楼上，我们也是这么做的。
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5楼2010-11-24 13:59:10
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tsingo

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
可以，变性温度要稍微长一些
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6楼2010-11-24 20:13:37
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zhaohq1209

铁杆木虫 (著名写手)
★
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引用回帖:
Originally posted by tsingo at 2010-11-24 20:13:37:
可以，变性温度要稍微长一些

应该是预变性时间稍长一点吧
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我有一个梦想，我梦想有一天，我们的人民可以根据自己的意愿与消费能力，居住在自己愿意居住的地方。
7楼2010-11-24 21:00:08
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丁丁猫

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
可以的，而且我觉得很灵敏，假阳性的概率很小
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8楼2010-11-24 21:08:00
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wjune1127

金虫 (正式写手)
完全可以！呵呵
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人生若只如初见，何事秋风悲画扇
9楼2010-11-24 22:18:56
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sxxuan

金虫 (著名写手)
可以 ，我都是这样做的。省很多功夫呢
假阳性也会有，所以做个阳性和阴性对照，和阳性对照的带一样亮的菌就当作阳性，再做下一步
赞一下 回复此楼
你的日子如何，你的力量也必如何！
10楼2010-11-25 10:18:37
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