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Hannet

金虫 (正式写手)

[交流] 凝胶层析和装柱以及柱效问题 已有9人参与

我在GE的sephacry s-100填料150ml,装在华美的1.6×70dcm的柱子中,做crude extract的分离,第一次装柱,没有用装柱器,用烧杯慢慢灌入,自然沉降。第一次跑得到很好地4个蛋白峰。入图1.1
以后重新装了好几次柱,都跑不出这样的效果,只有一个蛋白峰,后面的峰分不开。安装说明书上2步装柱法装的柱,今天用丙酮安装说明书上的方法测了一下柱效,跑出如下图1.2,这样的图,不知道是什么原因,柱效也没有计算,因为说明书上的测柱效的图,峰是对称的。因为没有装柱器,所以都是没有用,凝胶没有抽气,因为说明书没有要求抽气。凝胶是用dd H2O溶。
       不知道是什么原因,我想可能是过了多次后,柱子强结合的蛋白把微孔堵了,我安装说明用0.5M NaoH 和30%异丙醇洗过,在测住校的。
       安装时的流速都是安装要求,没有超过2ml/min。跑的流速是0.5-0.7ml/min。
       请大家提出宝贵的意见和指点。谢谢大家。

图1.1



图1.2
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小新3858

木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我之前装也出现过你这种情况,就是测柱效的图跟你这差不多,然后又重新装了一次就好了
说明书上提到说如果柱效出现这种峰型那就减小装柱时的流速,我推测原因可能是流速快导致柱子里的介质压得不均匀(上面实下面松),还有一点就是最好用装柱器,装之前介质一定要搅匀了,用玻璃棒慢慢搅,不能有块儿状的,然后往柱子里倒的时候也一定要慢,用玻璃棒引流倒入
19楼2013-11-18 11:25:09
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普通回帖

午后绿茶

新虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
你后来装的凝胶是先前用过的是吧,洗干净没有?
2楼2012-03-28 13:20:07
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chui2004

铁杆木虫 (正式写手)

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
rainwander: 金币+1, 鼓励交流 2012-03-29 08:41:33
你是在线洗的填料吗?
在线洗的话,有时也是洗不干净的。
我建议将填料拿出来洗,用砂芯漏斗在真空泵上进行抽洗,然后再装柱!
相信自己,一定能成功!
3楼2012-03-28 14:27:56
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Hannet

金虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by chui2004 at 2012-03-28 14:27:56:
你是在线洗的填料吗?
在线洗的话,有时也是洗不干净的。
我建议将填料拿出来洗,用砂芯漏斗在真空泵上进行抽洗,然后再装柱!

都是在线洗的,重新装柱很麻烦,而且不能保证每次都装的柱效很好,
4楼2012-03-28 19:30:02
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Hannet

金虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 午后绿茶 at 2012-03-28 13:20:07:
你后来装的凝胶是先前用过的是吧,洗干净没有?

安装说明用0.5M NaoH 和30%异丙醇洗的,应该洗干净了,你们不是在线洗的吗
5楼2012-03-28 19:31:11
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chui2004

铁杆木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
4楼: Originally posted by Hannet at 2012-03-28 19:30:02:
都是在线洗的,重新装柱很麻烦,而且不能保证每次都装的柱效很好,

不是用完后每次都拿出来清洗,是在做几次之后,层析分离效果不好的时候,拿出来清洗,再重新装柱,这样效果好一点。这也是一点经验之谈,不一定要这样做。
相信自己,一定能成功!
6楼2012-03-29 10:08:20
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dingx2005

金虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我也是买了这种填料,想请教一下楼主是怎么选择的流动相
人就这一辈子,能够从事自己喜欢的事情,并且可以从中获取生活资本,这是非常幸运的事情。
7楼2012-05-03 15:38:34
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Hannet

金虫 (正式写手)

引用回帖:
7楼: Originally posted by dingx2005 at 2012-05-03 15:38:34:
我也是买了这种填料,想请教一下楼主是怎么选择的流动相

我是分离蛋白,看文献,一般是buffer
8楼2012-05-03 20:39:16
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danbomingyue

禁虫 (正式写手)

★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
zhang8826857: 金币+3, 欢迎常来微生物板块交流哦^_^ 2012-05-04 14:45:30
本帖内容被屏蔽

9楼2012-05-04 14:08:19
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danbomingyue

禁虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
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10楼2012-05-04 15:01:26
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