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凝胶层析和装柱以及柱效问题 已有9人参与
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我在GE的sephacry s-100填料150ml，装在华美的1.6×70dcm的柱子中，做crude extract的分离，第一次装柱，没有用装柱器，用烧杯慢慢灌入，自然沉降。第一次跑得到很好地4个蛋白峰。入图1.1 以后重新装了好几次柱，都跑不出这样的效果，只有一个蛋白峰，后面的峰分不开。安装说明书上2步装柱法装的柱，今天用丙酮安装说明书上的方法测了一下柱效，跑出如下图1.2，这样的图，不知道是什么原因，柱效也没有计算，因为说明书上的测柱效的图，峰是对称的。因为没有装柱器，所以都是没有用，凝胶没有抽气，因为说明书没有要求抽气。凝胶是用dd H2O溶。 不知道是什么原因，我想可能是过了多次后，柱子强结合的蛋白把微孔堵了，我安装说明用0.5M NaoH 和30%异丙醇洗过，在测住校的。 安装时的流速都是安装要求，没有超过2ml/min。跑的流速是0.5-0.7ml/min。 请大家提出宝贵的意见和指点。谢谢大家。  图1.1  图1.2 |
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