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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 凝胶层析和装柱以及柱效问题
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Hannet

金虫 (正式写手)

[交流] 凝胶层析和装柱以及柱效问题已有9人参与

我在GE的sephacry s-100填料150ml，装在华美的1.6×70dcm的柱子中，做crude extract的分离，第一次装柱，没有用装柱器，用烧杯慢慢灌入，自然沉降。第一次跑得到很好地4个蛋白峰。入图1.1
以后重新装了好几次柱，都跑不出这样的效果，只有一个蛋白峰，后面的峰分不开。安装说明书上2步装柱法装的柱，今天用丙酮安装说明书上的方法测了一下柱效，跑出如下图1.2，这样的图，不知道是什么原因，柱效也没有计算，因为说明书上的测柱效的图，峰是对称的。因为没有装柱器，所以都是没有用，凝胶没有抽气，因为说明书没有要求抽气。凝胶是用dd H2O溶。
       不知道是什么原因，我想可能是过了多次后，柱子强结合的蛋白把微孔堵了，我安装说明用0.5M NaoH 和30%异丙醇洗过，在测住校的。
       安装时的流速都是安装要求，没有超过2ml/min。跑的流速是0.5-0.7ml/min。
       请大家提出宝贵的意见和指点。谢谢大家。

图1.1



图1.2
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1楼2012-03-27 20:40:02
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chui2004

铁杆木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
rainwander: 金币+1, 鼓励交流 2012-03-29 08:41:33
你是在线洗的填料吗？
在线洗的话，有时也是洗不干净的。
我建议将填料拿出来洗，用砂芯漏斗在真空泵上进行抽洗，然后再装柱！
赞一下 回复此楼
相信自己，一定能成功！
3楼2012-03-28 14:27:56
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午后绿茶

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你后来装的凝胶是先前用过的是吧，洗干净没有？
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2楼2012-03-28 13:20:07
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Hannet

金虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by chui2004 at 2012-03-28 14:27:56:
你是在线洗的填料吗？
在线洗的话，有时也是洗不干净的。
我建议将填料拿出来洗，用砂芯漏斗在真空泵上进行抽洗，然后再装柱！

都是在线洗的，重新装柱很麻烦，而且不能保证每次都装的柱效很好，
赞一下 回复此楼
4楼2012-03-28 19:30:02
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Hannet

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 午后绿茶 at 2012-03-28 13:20:07:
你后来装的凝胶是先前用过的是吧，洗干净没有？

安装说明用0.5M NaoH 和30%异丙醇洗的，应该洗干净了，你们不是在线洗的吗
赞一下 回复此楼
5楼2012-03-28 19:31:11
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