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Hannet

金虫 (正式写手)

[交流] 凝胶层析和装柱以及柱效问题 已有9人参与

我在GE的sephacry s-100填料150ml,装在华美的1.6×70dcm的柱子中,做crude extract的分离,第一次装柱,没有用装柱器,用烧杯慢慢灌入,自然沉降。第一次跑得到很好地4个蛋白峰。入图1.1
以后重新装了好几次柱,都跑不出这样的效果,只有一个蛋白峰,后面的峰分不开。安装说明书上2步装柱法装的柱,今天用丙酮安装说明书上的方法测了一下柱效,跑出如下图1.2,这样的图,不知道是什么原因,柱效也没有计算,因为说明书上的测柱效的图,峰是对称的。因为没有装柱器,所以都是没有用,凝胶没有抽气,因为说明书没有要求抽气。凝胶是用dd H2O溶。
       不知道是什么原因,我想可能是过了多次后,柱子强结合的蛋白把微孔堵了,我安装说明用0.5M NaoH 和30%异丙醇洗过,在测住校的。
       安装时的流速都是安装要求,没有超过2ml/min。跑的流速是0.5-0.7ml/min。
       请大家提出宝贵的意见和指点。谢谢大家。

图1.1



图1.2
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danbomingyue

禁虫 (正式写手)

★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
zhang8826857: 金币+3, 欢迎常来微生物板块交流哦^_^ 2012-05-04 14:45:30
本帖内容被屏蔽

9楼2012-05-04 14:08:19
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午后绿茶

新虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
你后来装的凝胶是先前用过的是吧,洗干净没有?
2楼2012-03-28 13:20:07
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chui2004

铁杆木虫 (正式写手)

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
rainwander: 金币+1, 鼓励交流 2012-03-29 08:41:33
你是在线洗的填料吗?
在线洗的话,有时也是洗不干净的。
我建议将填料拿出来洗,用砂芯漏斗在真空泵上进行抽洗,然后再装柱!
相信自己,一定能成功!
3楼2012-03-28 14:27:56
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Hannet

金虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by chui2004 at 2012-03-28 14:27:56:
你是在线洗的填料吗?
在线洗的话,有时也是洗不干净的。
我建议将填料拿出来洗,用砂芯漏斗在真空泵上进行抽洗,然后再装柱!

都是在线洗的,重新装柱很麻烦,而且不能保证每次都装的柱效很好,
4楼2012-03-28 19:30:02
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