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805085868

铁虫 (小有名气)


[交流] 由于中途有点事情,转化感受态细胞在哪一步可以停一停啊?

由于中途有点事情,转化感受态细胞在哪一步可以停一停啊?
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atlanticwi

金虫 (正式写手)


★ ★ ★
805085868(金币+1): 谢谢参与
西瓜: 金币+2, 鼓励~今天很活跃啊 2012-03-25 16:21:28
嗯.......
这个,感受态制好后,可以在冰水混合物上放置较长时间,一旦开始转化,除了转化完后可以冷却时间有所调整,到菌复苏、涂板各步骤,真想不起哪部可以停较长时间了.........所以我觉得一旦开始做最好就不要停了
2楼2012-03-25 13:49:08
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★ ★ ★
805085868(金币+1): 谢谢参与
西瓜: 金币+2, 斑斑百忙之中来帮忙啊~ 2012-03-25 16:22:07
如是转化质粒,问题不大,实在不行就混混热激下稍稍咬下直接图了,要不冰着,连接产物就不太好停了。

制备感受态,以前中间没停过,但我觉得冰浴那几部多放放应该问题不大,仅供参考。
3楼2012-03-25 13:57:58
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aoaoshch

木虫 (小有名气)


★ ★ ★
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小丹木木: 金币+2, 很认同 2012-03-27 11:39:21
停一下,可能效率就降低了。最好别停啊。
从-70度拿出感受态CELL,冰上待融,5分钟。
加你的片段,混匀,冰浴10~30分钟。
42度热激1分钟,冰浴1分钟,加培养基孵育40~60分钟。
涂板,5分钟。
你看看能否抽出时间……

做实验最好不要忙其他的,一会就忘了到哪一步了。
4楼2012-03-26 22:11:33
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良民123

新虫 (初入文坛)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
孵育的时候可以降低转速,就可以稍微孵育长一些时间
5楼2012-03-26 22:43:56
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cgspider

木虫 (正式写手)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
转化的过程中,时间和温度都很重要,一点儿都不得停。。
6楼2012-03-27 10:44:22
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跳跳鱼

木虫 (著名写手)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
不能停吧   要想停一下就是加培养基后  复苏时1个小时  你可以干其他滴  
7楼2012-03-27 21:51:02
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scienzyme

铁杆木虫 (著名写手)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
转化大肠杆菌感受态细胞时,如果是完好的质粒,可以省略掉37度复苏振荡培养的步骤,热激后在冰上静置1分钟即可涂平板。如果是刚刚连接完的产物,则要在37度振荡1小时。
8楼2012-03-28 11:14:34
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