[交流] 由于中途有点事情，转化感受态细胞在哪一步可以停一停啊？

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1楼2012-03-25 13:02:25

atlanticwi

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嗯.......
这个，感受态制好后，可以在冰水混合物上放置较长时间，一旦开始转化，除了转化完后可以冷却时间有所调整，到菌复苏、涂板各步骤，真想不起哪部可以停较长时间了.........所以我觉得一旦开始做最好就不要停了

2楼2012-03-25 13:49:08

telomerase

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如是转化质粒，问题不大，实在不行就混混热激下稍稍咬下直接图了，要不冰着，连接产物就不太好停了。

制备感受态，以前中间没停过，但我觉得冰浴那几部多放放应该问题不大，仅供参考。

3楼2012-03-25 13:57:58

aoaoshch

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停一下，可能效率就降低了。最好别停啊。
从-70度拿出感受态CELL，冰上待融，5分钟。
加你的片段，混匀，冰浴10～30分钟。
42度热激1分钟，冰浴1分钟，加培养基孵育40～60分钟。
涂板，5分钟。
你看看能否抽出时间……

做实验最好不要忙其他的，一会就忘了到哪一步了。

4楼2012-03-26 22:11:33

良民123

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孵育的时候可以降低转速，就可以稍微孵育长一些时间

5楼2012-03-26 22:43:56

cgspider

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转化的过程中，时间和温度都很重要，一点儿都不得停。。

6楼2012-03-27 10:44:22

跳跳鱼

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不能停吧要想停一下就是加培养基后复苏时1个小时你可以干其他滴

7楼2012-03-27 21:51:02

scienzyme

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转化大肠杆菌感受态细胞时，如果是完好的质粒，可以省略掉37度复苏振荡培养的步骤，热激后在冰上静置1分钟即可涂平板。如果是刚刚连接完的产物，则要在37度振荡1小时。

8楼2012-03-28 11:14:34