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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 由于中途有点事情，转化感受态细胞在哪一步可以停一停啊？
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805085868

铁虫 (小有名气)

[交流] 由于中途有点事情，转化感受态细胞在哪一步可以停一停啊？

由于中途有点事情，转化感受态细胞在哪一步可以停一停啊？
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1楼 2012-03-25 13:02:25
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scienzyme

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
转化大肠杆菌感受态细胞时，如果是完好的质粒，可以省略掉37度复苏振荡培养的步骤，热激后在冰上静置1分钟即可涂平板。如果是刚刚连接完的产物，则要在37度振荡1小时。
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8楼2012-03-28 11:14:34
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atlanticwi

金虫 (正式写手)
★ ★ ★
805085868(金币+1): 谢谢参与
西瓜: 金币+2, 鼓励~今天很活跃啊 2012-03-25 16:21:28
嗯.......
这个，感受态制好后，可以在冰水混合物上放置较长时间，一旦开始转化，除了转化完后可以冷却时间有所调整，到菌复苏、涂板各步骤，真想不起哪部可以停较长时间了.........所以我觉得一旦开始做最好就不要停了
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2楼2012-03-25 13:49:08
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telomerase

至尊木虫 (著名写手)
★ ★ ★
805085868(金币+1): 谢谢参与
西瓜: 金币+2, 斑斑百忙之中来帮忙啊~ 2012-03-25 16:22:07
如是转化质粒，问题不大，实在不行就混混热激下稍稍咬下直接图了，要不冰着，连接产物就不太好停了。

制备感受态，以前中间没停过，但我觉得冰浴那几部多放放应该问题不大，仅供参考。
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3楼2012-03-25 13:57:58
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aoaoshch

木虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小丹木木: 金币+2, 很认同 2012-03-27 11:39:21
停一下，可能效率就降低了。最好别停啊。
从-70度拿出感受态CELL，冰上待融，5分钟。
加你的片段，混匀，冰浴10～30分钟。
42度热激1分钟，冰浴1分钟，加培养基孵育40～60分钟。
涂板，5分钟。
你看看能否抽出时间……

做实验最好不要忙其他的，一会就忘了到哪一步了。
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4楼2012-03-26 22:11:33
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