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feichen2008

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[求助] 请教有关基因插入突变的问题

最近在做细菌的插入突变，想请教一下各位虫子们，我在筛选突变体的时候进行PCR扩增验证，用的是该基因的上下游引物，结果扩出两条带，其中一条是目的基因的大小，这说明什么？是不是进行了单交换，能说明该基因失活吗？谢谢各位！

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1楼 2012-03-23 09:28:59

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to-be

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【答案】应助回帖

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feichen2008: 金币+5, ★★★很有帮助 2012-03-24 21:55:17

扩出来两条带，并且有一个对的，说明是多点插入，至少有一个是对的。可以做southern验证。但是表型不可靠，说不清此表型是否由目的基因突变所致。所以最好能拿到southern验证后的单插入，最可靠。

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生活是面镜子~

2楼2012-03-24 21:04:07

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feichen2008

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引用回帖:

2楼: Originally posted by to-be at 2012-03-24 01:04:07:
扩出来两条带，并且有一个对的，说明是多点插入，至少有一个是对的。可以做southern验证。但是表型不可靠，说不清此表型是否由目的基因突变所致。所以最好能拿到southern验证后的单插入，最可靠。

如果是一条带的话是不是就说明是单插入？为什么会多点插入？是不是说明基因组中存在另外的同源片段？

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3楼2012-03-24 21:58:41

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