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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 胶体金标记抗体是否成功？（试纸条实验）
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antty

铜虫 (小有名气)

[求助] 胶体金标记抗体是否成功？（试纸条实验）

胶体金，抗原，抗体和二抗都是买的
按文献的方法先将抗体透析，调节胶体金的pH后，将最佳结合量与胶体金结合固定，
用1%的BSA稳定结合液。
过夜后将结合液低温高速离心，得到浓缩的胶体金标记抗体液。
将金标抗体液滴加在包被了抗原和二抗的NC膜上，发现二抗处有明显条带，可是抗原处什么颜色都没有，就是只有C线没有T线，重复了几次都是这样。
请问：1.是金标记抗体过程有问题吗？标记时是否改变了抗体的特异性结合位点导致无法与抗原结合？
      2.所有材料都是买的，没有自己做过Elisa验证，有没有可能是抗原抗体本身结合性的问题？

望高手赐教！！！

[ Last edited by antty on 2012-3-22 at 20:00 ]
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1楼 2012-03-22 19:57:28
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我是XP

新虫 (初入文坛)
C线出现明显条带基本上可以判断偶联是成功的，至于为什么T线不显色，原因可能是由于T线包被的抗原浓度过低了
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4楼2015-08-23 08:48:02
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antty

铜虫 (小有名气)
★
西瓜: 金币+1, 发现原因就好~鼓励反馈哦！ 2012-03-29 17:43:41
将抗原做了紫外吸光度扫描，发现是抗原偶联物出了问题，准备重新买一批再看看
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2楼2012-03-29 16:01:29
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wfs0620

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

是这样的，透析是常用的技术，但是你的透析袋的孔径是多少？
大部分抗原透析后活性会降很多，有的甚至会透析到透析液中，完全没有活性。
解决办法是：
抗原一般离心一下即可，或者直接标记
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继续加油
3楼2012-05-10 17:29:57
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