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antty

铜虫 (小有名气)

[求助] 胶体金标记抗体是否成功?(试纸条实验)

胶体金,抗原,抗体和二抗都是买的
按文献的方法先将抗体透析,调节胶体金的pH后,将最佳结合量与胶体金结合固定,
用1%的BSA稳定结合液。
过夜后将结合液低温高速离心,得到浓缩的胶体金标记抗体液。
将金标抗体液滴加在包被了抗原和二抗的NC膜上,发现二抗处有明显条带,可是抗原处什么颜色都没有,就是只有C线没有T线,重复了几次都是这样。
请问:1.是金标记抗体过程有问题吗?标记时是否改变了抗体的特异性结合位点导致无法与抗原结合?
      2.所有材料都是买的,没有自己做过Elisa验证,有没有可能是抗原抗体本身结合性的问题?

望高手赐教!!!

[ Last edited by antty on 2012-3-22 at 20:00 ]
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antty

铜虫 (小有名气)


西瓜: 金币+1, 发现原因就好~鼓励反馈哦! 2012-03-29 17:43:41
将抗原做了紫外吸光度扫描,发现是抗原偶联物出了问题,准备重新买一批再看看
2楼2012-03-29 16:01:29
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wfs0620

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

是这样的,透析是常用的技术,但是你的透析袋的孔径是多少?
大部分抗原透析后活性会降很多,有的甚至会透析到透析液中,完全没有活性。
解决办法是:
抗原一般离心一下即可,或者直接标记
继续加油
3楼2012-05-10 17:29:57
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我是XP

新虫 (初入文坛)

C线出现明显条带基本上可以判断偶联是成功的,至于为什么T线不显色,原因可能是由于T线包被的抗原浓度过低了
4楼2015-08-23 08:48:02
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