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云淡风轻win

铁虫 (小有名气)

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[求助] 原代培养细胞不知有什么问题，求助

最近我做鸭胚肝细胞原代培养，发现有个问题，刚刚做出来还好，一天后看细胞好像都是碎片，求各位大侠帮忙看看怎么回事？
   图片18.2是刚刚原代分离出来的细胞
   图片23是24h后细胞的形态
   求助大家了！

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2012-03-21 15:38:05, 168.04 K

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1楼2012-03-21 15:41:17

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云淡风轻win

铁虫 (小有名气)

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引用回帖:

3楼: Originally posted by chiscien at 2012-05-16 16:52:00:
可能鸭肝细胞做起来会比较复杂，我们只做过大小鼠的，不确定能不能帮得上忙，希望你试验成功哦！

谢谢啦！

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4楼2012-05-21 12:16:46

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chiscien

铁虫 (初入文坛)

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
云淡风轻win: 金币+10, ★★★很有帮助, 回答的很详细！ 2012-05-18 09:07:52
xiaoxiao270: 金币+1, 3Q 2012-05-21 12:39:52

你好，我们实验室做过大小鼠的原代肝细胞，看了你的第一个图片好像细胞还没有完全生长开来，我们养的肝细胞呈圆形或多角形，细胞核大，为卵圆形或圆球形，居中，细胞质较少，常染色质丰富，部分有双核或多倍体核。第二张图片就感觉像是污染了一样，浑浊，细胞貌似挺小的，看不太清楚。
消化培养肝细胞我们用的是灌流法；肝脏灌流需用全肝，以较小动物如小鼠和大鼠为好。
1．无菌解剖动物，取出肝脏，先用BSS洗除血污。
2．取5ml注射器一支，吸取消化液后，把注射器头轻轻插入肝管中，用线绳结扎牢固，以防消化液漏出，轻轻把消化液注入肝管系统，并不时轻揉压肝脏，以便消化液进入肝小叶中；消化液在肝内停留20～30分后，在吸出消化液的同时并轻揉压肝脏，以使肝细胞脱落和消化液吸出。
3．待吸净消化液后，注入离心管中，低速离心分离，用RPMI 1640培养基培养（较其它培养基为好），能获得较纯的肝上皮细胞和获较好的效果。