24小时热门版块排行榜    

查看: 2533  |  回复: 4
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

chenyu05

新虫 (初入文坛)

[求助] 关于SOD同工酶染色

最近一直在做SOD同工酶电泳,对SOD同工酶的染色有诸多疑问,我采用的是NBT染色法,步骤如下:
1. 先将凝胶在黑暗中浸泡于2.45×10-3mol/LNBT溶液中20分钟,
  2.然后再将凝胶在黑暗中放入含有0.028mol/LTEMED,2.8×10-5mol/L核黄素,0.036mol/L PH7.8磷酸缓冲液中浸泡15分钟,
  3. 最后将凝胶浸泡在含有1×10-4mol/L EDTA的0.05mol/LPH7.8磷酸缓冲液中,用4000lx光照25-30分钟

不知道是不是我的方法有问题,我最后得到的酶带只有一条主带。而且很不清晰,一照相就看不出来了。
请各位帮我看看是不是我的染色配方有问题?NBT溶液的浓度是不是太大了?
另外能否帮忙那个推荐一下相关的英文文献?找了好久都没找到这样的英文文献。
非常感谢!
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sstefsun0630

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by sayaya at 2012-04-17 09:48:32
向你推荐 Francke 1979年发表于 PNAS 的方法:

1. 先将凝胶放入 50mM 磷酸缓冲液(pH7.8)中孵育10 分钟,中途换液一次;
2. 浸泡于 1 mg/ml 的NBT溶液中孵育 10分钟,
3 .然后再将凝胶在含有 3.25 mg/ml TEME ...

你好,我想问你下你能提供一下PNAS上这篇文章的全名么?
4楼2014-06-18 20:28:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 5 个回答

sayaya

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助 2012-04-17 13:38:50
向你推荐 Francke 1979年发表于 PNAS 的方法:

1. 先将凝胶放入 50mM 磷酸缓冲液(pH7.8)中孵育10 分钟,中途换液一次;
2. 浸泡于 1 mg/ml 的NBT溶液中孵育 10分钟,
3 .然后再将凝胶在含有 3.25 mg/ml TEMED, 0.01 mg/ml 核黄素的 50 mM PH7.8磷酸缓冲液中浸泡10分钟,
4. 在荧光下可见清晰的SOD活性区域。
2楼2012-04-17 09:48:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kikijin1988

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

我昨天也按照这个方法做了SOD同工酶,跟你的结果一样。我考虑是不是制胶的过程出了问题。我的分离胶缓冲液ph8.9 2ml,浓缩胶缓冲液ph是6.8 1.25ml,30%ACR/BIS液分别是2.72ml、0.5ml,H2O分别是10.88ml、2.65ml,10%AP 0.16ml、0.05ml,TEMED分别是 0.016ml、0.004ml。请问现在你找到方法了吗?
3楼2013-06-18 13:18:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ninxia1

禁虫 (著名写手)

本帖内容被屏蔽

5楼2016-05-09 10:31:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 288求调剂,一志愿华南理工大学071005 +5 ioodiiij 2026-03-17 5/250 2026-03-19 18:22 by zcl123
[考研] 一志愿天津大学化学工艺专业(081702)315分求调剂 +11 yangfz 2026-03-17 11/550 2026-03-19 15:06 by houyaoxu
[考研] 化学求调剂 +3 临泽境llllll 2026-03-17 4/200 2026-03-19 13:59 by houyaoxu
[考研] 085600材料与化工求调剂 +6 绪幸与子 2026-03-17 6/300 2026-03-19 13:27 by houyaoxu
[考研] 287求调剂 +3 晨昏线与星海 2026-03-19 4/200 2026-03-19 12:32 by peike
[教师之家] 焦虑 +9 水冰月月野兔 2026-03-13 13/650 2026-03-19 09:50 by otani
[考研] 0703化学 305求调剂 +4 FY_yy 2026-03-14 4/200 2026-03-19 05:54 by anny19840123
[考研] 0703化学调剂,求各位老师收留 +10 秋有木北 2026-03-14 10/500 2026-03-19 05:52 by anny19840123
[考研] 295求调剂 +3 一志愿京区211 2026-03-18 5/250 2026-03-18 17:03 by zhaoqian0518
[硕博家园] 湖北工业大学 生命科学与健康学院-课题组招收2026级食品/生物方向硕士 +3 1喜春8 2026-03-17 5/250 2026-03-17 17:18 by ber川cool子
[考研] 材料专硕326求调剂 +6 墨煜姒莘 2026-03-15 7/350 2026-03-17 17:10 by ruiyingmiao
[考研] 302求调剂 +4 小贾同学123 2026-03-15 8/400 2026-03-17 10:33 by 小贾同学123
[考研] 一志愿,福州大学材料专硕339分求调剂 +3 木子momo青争 2026-03-15 3/150 2026-03-17 07:52 by laoshidan
[考研] 22408总分284求调剂 +3 InAspic 2026-03-13 3/150 2026-03-15 11:10 by zhq0425
[考研] 289求调剂 +4 这么名字咋样 2026-03-14 6/300 2026-03-14 18:58 by userper
[考研] 中科大材料专硕319求调剂 +3 孟鑫材料 2026-03-13 3/150 2026-03-14 18:10 by houyaoxu
[考研] 复试调剂 +3 呼呼?~+123456 2026-03-14 3/150 2026-03-14 16:53 by WTUChen
[考研] 330求调剂 +3 ?酱给调剂跪了 2026-03-13 3/150 2026-03-14 10:13 by JourneyLucky
[考研] 招收0805(材料)调剂 +3 18595523086 2026-03-13 3/150 2026-03-14 00:33 by 123%、
[考研] 308求调剂 +3 是Lupa啊 2026-03-12 3/150 2026-03-13 14:30 by 求调剂zz
信息提示
请填处理意见