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chenyu05

新虫 (初入文坛)

[求助] 关于SOD同工酶染色

最近一直在做SOD同工酶电泳,对SOD同工酶的染色有诸多疑问,我采用的是NBT染色法,步骤如下:
1. 先将凝胶在黑暗中浸泡于2.45×10-3mol/LNBT溶液中20分钟,
  2.然后再将凝胶在黑暗中放入含有0.028mol/LTEMED,2.8×10-5mol/L核黄素,0.036mol/L PH7.8磷酸缓冲液中浸泡15分钟,
  3. 最后将凝胶浸泡在含有1×10-4mol/L EDTA的0.05mol/LPH7.8磷酸缓冲液中,用4000lx光照25-30分钟

不知道是不是我的方法有问题,我最后得到的酶带只有一条主带。而且很不清晰,一照相就看不出来了。
请各位帮我看看是不是我的染色配方有问题?NBT溶液的浓度是不是太大了?
另外能否帮忙那个推荐一下相关的英文文献?找了好久都没找到这样的英文文献。
非常感谢!
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sayaya

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助 2012-04-17 13:38:50
向你推荐 Francke 1979年发表于 PNAS 的方法:

1. 先将凝胶放入 50mM 磷酸缓冲液(pH7.8)中孵育10 分钟,中途换液一次;
2. 浸泡于 1 mg/ml 的NBT溶液中孵育 10分钟,
3 .然后再将凝胶在含有 3.25 mg/ml TEMED, 0.01 mg/ml 核黄素的 50 mM PH7.8磷酸缓冲液中浸泡10分钟,
4. 在荧光下可见清晰的SOD活性区域。
2楼2012-04-17 09:48:32
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kikijin1988

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

我昨天也按照这个方法做了SOD同工酶,跟你的结果一样。我考虑是不是制胶的过程出了问题。我的分离胶缓冲液ph8.9 2ml,浓缩胶缓冲液ph是6.8 1.25ml,30%ACR/BIS液分别是2.72ml、0.5ml,H2O分别是10.88ml、2.65ml,10%AP 0.16ml、0.05ml,TEMED分别是 0.016ml、0.004ml。请问现在你找到方法了吗?
3楼2013-06-18 13:18:33
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sstefsun0630

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by sayaya at 2012-04-17 09:48:32
向你推荐 Francke 1979年发表于 PNAS 的方法:

1. 先将凝胶放入 50mM 磷酸缓冲液(pH7.8)中孵育10 分钟,中途换液一次;
2. 浸泡于 1 mg/ml 的NBT溶液中孵育 10分钟,
3 .然后再将凝胶在含有 3.25 mg/ml TEME ...

你好,我想问你下你能提供一下PNAS上这篇文章的全名么?
4楼2014-06-18 20:28:17
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ninxia1

禁虫 (著名写手)

本帖内容被屏蔽

5楼2016-05-09 10:31:08
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