24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 2557  |  回复: 4

chenyu05

新虫 (初入文坛)

[求助] 关于SOD同工酶染色

最近一直在做SOD同工酶电泳,对SOD同工酶的染色有诸多疑问,我采用的是NBT染色法,步骤如下:
1. 先将凝胶在黑暗中浸泡于2.45×10-3mol/LNBT溶液中20分钟,
  2.然后再将凝胶在黑暗中放入含有0.028mol/LTEMED,2.8×10-5mol/L核黄素,0.036mol/L PH7.8磷酸缓冲液中浸泡15分钟,
  3. 最后将凝胶浸泡在含有1×10-4mol/L EDTA的0.05mol/LPH7.8磷酸缓冲液中,用4000lx光照25-30分钟

不知道是不是我的方法有问题,我最后得到的酶带只有一条主带。而且很不清晰,一照相就看不出来了。
请各位帮我看看是不是我的染色配方有问题?NBT溶液的浓度是不是太大了?
另外能否帮忙那个推荐一下相关的英文文献?找了好久都没找到这样的英文文献。
非常感谢!
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sayaya

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助 2012-04-17 13:38:50
向你推荐 Francke 1979年发表于 PNAS 的方法:

1. 先将凝胶放入 50mM 磷酸缓冲液(pH7.8)中孵育10 分钟,中途换液一次;
2. 浸泡于 1 mg/ml 的NBT溶液中孵育 10分钟,
3 .然后再将凝胶在含有 3.25 mg/ml TEMED, 0.01 mg/ml 核黄素的 50 mM PH7.8磷酸缓冲液中浸泡10分钟,
4. 在荧光下可见清晰的SOD活性区域。
2楼2012-04-17 09:48:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kikijin1988

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

我昨天也按照这个方法做了SOD同工酶,跟你的结果一样。我考虑是不是制胶的过程出了问题。我的分离胶缓冲液ph8.9 2ml,浓缩胶缓冲液ph是6.8 1.25ml,30%ACR/BIS液分别是2.72ml、0.5ml,H2O分别是10.88ml、2.65ml,10%AP 0.16ml、0.05ml,TEMED分别是 0.016ml、0.004ml。请问现在你找到方法了吗?
3楼2013-06-18 13:18:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sstefsun0630

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by sayaya at 2012-04-17 09:48:32
向你推荐 Francke 1979年发表于 PNAS 的方法:

1. 先将凝胶放入 50mM 磷酸缓冲液(pH7.8)中孵育10 分钟,中途换液一次;
2. 浸泡于 1 mg/ml 的NBT溶液中孵育 10分钟,
3 .然后再将凝胶在含有 3.25 mg/ml TEME ...

你好,我想问你下你能提供一下PNAS上这篇文章的全名么?
4楼2014-06-18 20:28:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ninxia1

禁虫 (著名写手)

本帖内容被屏蔽

5楼2016-05-09 10:31:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 chenyu05 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 308求调剂 +17 墨墨漠 2026-04-06 17/850 2026-04-09 09:25 by 壹往無前
[考研] 求调剂 +13 柒luck 2026-04-07 13/650 2026-04-08 22:46 by 猪会飞
[考研] 一志愿211,化学学硕,310分,本科重点双非,求调剂 +15 努力奋斗112 2026-04-06 17/850 2026-04-08 22:27 by 凯凯要变帅
[考研] 293分求调剂,外语为俄语 +7 加一一九 2026-04-07 10/500 2026-04-08 20:14 by yutian743
[考研] 275求调剂 +4 1624447980 2026-04-08 5/250 2026-04-08 15:29 by 哦哦123
[考研] 336求调剂,一志愿中科大 +9 墨彧 yuyu 2026-04-06 9/450 2026-04-08 11:24 by 想读书的菌菌
[考研] 求调剂 +11 wwwwabcde 2026-04-07 11/550 2026-04-07 23:16 by JourneyLucky
[考研] 319分085702安全工程求调剂 +6 rious 2026-04-05 6/300 2026-04-07 09:42 by jp9609
[考研] 材料调剂 +6 一样YWY 2026-04-05 6/300 2026-04-05 20:30 by 南航~万老师
[考研] 生物与医药调剂 +4 十七sa 2026-04-05 4/200 2026-04-05 20:05 by lys0704
[考研] 295求调剂 +8 FZAC123 2026-04-03 8/400 2026-04-05 17:46 by 蓝云思雨
[考研] 288求调剂,一志愿华南理工大学071005 +6 ioodiiij 2026-04-04 6/300 2026-04-05 10:09 by guoweigw
[考研] 材料化工306分找合适调剂 +14 沧海轻舟e 2026-04-04 14/700 2026-04-05 09:53 by 朱云虎202
[考研] 344材料与化工调剂 +9 调剂上岸玘 2026-04-03 9/450 2026-04-04 23:10 by happyddm
[考研] 324求调剂 +14 想上学求调 2026-04-02 15/750 2026-04-04 20:31 by 无际的草原
[考研] 278求调剂 +3 依旧! 2026-04-02 4/200 2026-04-04 20:27 by 蓝云思雨
[考研] 一志愿上海大学生物学346 +3 上海大学346调剂 2026-04-03 3/150 2026-04-04 20:20 by dongzh2009
[考研] 085602 找调剂 +4 逆时针快乐 2026-04-02 4/200 2026-04-04 19:32 by 蓝云思雨
[考研] 求调剂 +6 朔朔话 2026-04-02 7/350 2026-04-04 19:16 by 蓝云思雨
[考研] 285求调剂 +8 AZMK 2026-04-02 11/550 2026-04-02 20:16 by yulian1987
信息提示
请填处理意见