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心台明镜

木虫 (初入文坛)

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[求助] 方法学验证保留时间不稳定

近期做某原料杂质C的方法学验证，条件如下，但是杂质保留时间一天之内总是变化，每进一针约提前0.2分钟，致使系统适用性达不到要求，请教高手指点

色谱柱：正相柱，C8，250*4.6mm，5um
流速：2.0ml/min
流动相：冰醋酸-二氯甲烷-正己烷（1：5：82）
柱温：25度
进样：20ul

条件参照欧洲药典，其中正己烷有挥发性，不知道是否是因为这个原因
如果是的话，我们应该如何调整色谱条件，又或者下一步应如何进行
恳请指教，万分感谢！

[ Last edited by 心台明镜 on 2012-3-6 at 16:38 ]

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1楼 2012-03-06 16:19:11

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wangyuanji

银虫 (小有名气)

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★
zhychen2008(金币+1): 多谢参与 2012-03-06 22:21:28

正向系统没有做过，不敢乱说。仅是猜测。
有可能是你的流动相有挥发性，那就应该更好的密封之；还有可能你们的室内温度高，你的柱温箱不能制冷，导致色谱柱一天之内温度有差别，引起保留时间的差异，每进一针总是提前0.2分钟（柱温有可能增加）。

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心态比能力重要

2楼2012-03-06 18:35:30

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louxiaoli99

新虫 (初入文坛)

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同意上面的观点，室内的温度也会影响流动相的温度

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3楼2012-03-07 09:38:39

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c402073239

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
心台明镜(金币+10): ★★★很有帮助谢谢，调到30度试了下，虽然还有提前，但是RSD可以达到要求了^_^ 2012-03-07 12:43:22
zhoudeli(金币+1): 多谢参与 2012-03-07 16:02:02

一般做正相系统的话：
1、你的流动相配制的时候，要充分混匀，超声脱气，放到仪器上，要把流动相密封好，不能让流动相有挥发，导致流动相比例发生变化，使得你的保留时间发生改变。
2、流动相每次都要重新配制，正相的溶剂比较容易挥发的原因。
3、有的时候出峰时间提前也不一定是流动相的原因，你可以把柱温提高到30度，每针进样时间延长一点，3倍以上看看。还有你在进完样品后，插针空白，再进样试试。如果是药典的方法，应该问题不大。