24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 2098  |  回复: 6
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

zhougang110

银虫 (小有名气)

[求助] 地衣芽孢杆菌的基因敲除到底如何做啊?

本人想在地衣芽孢杆菌里敲除一个基因,在新霉素抗性基因两端连接了基因的上下游同源臂,此片段电转入地衣芽孢杆菌的感受态里,可是怎么也长不出来转化子?新霉素筛选平板的浓度为50ppm。哪位虫友做过相关的实验?能否给俺指点一下?谢谢!
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

刘玉佩

金虫 (小有名气)

我们做高等动物细胞的基因敲除,但是原理是一样的,你看敲除的基因是不是致死的?或者同源臂比较短,这种只依靠同源臂来重组的方法效率是相当低的,楼主应该多点耐心!
6楼2013-01-10 16:51:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答

zhaohq1209

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
amisking(金币+2): 鼓励积极应助! 2012-03-05 18:30:17
zhougang110: 金币+5, 有帮助 2012-04-08 08:33:56
lz用的方法应该叫做one-step inactivation,一步缺失法。我之前做过,是用此方法缺失大肠杆菌中的基因,而且这基因位于质粒上。lz筛不到阳性克隆,可能转化效率低或者同源重组效率低。建议增加同源臂的长度(两端大小应差不多)、优化电转化条件、降低筛选平板上的新霉素浓度,或者干脆用自杀质粒,效率比较高。
我有一个梦想,我梦想有一天,我们的人民可以根据自己的意愿与消费能力,居住在自己愿意居住的地方。
3楼2012-03-05 13:23:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhougang110

银虫 (小有名气)

还有没有虫友给点建议?
4楼2012-03-06 10:12:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liyutan2006

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
用过大肠杆菌基因敲除试剂盒,最适合长杆菌,如大肠、枯草。http://www.ruiyang-biotech.com/_d272408409.htm
自己去咨询看看。
5楼2012-04-06 16:15:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 333求调剂 +7 87639 2026-03-21 12/600 2026-03-26 22:08 by 不吃魚的貓
[考研] 08工学调剂 +13 用户573181 2026-03-20 20/1000 2026-03-26 21:22 by 用户573181
[考研] 321求调剂 +6 Ymlll 2026-03-24 6/300 2026-03-26 20:50 by 不吃魚的貓
[考研] 求调剂 +5 芦lty 2026-03-25 6/300 2026-03-26 20:49 by 不吃魚的貓
[考研] 07化学280分求调剂 +8 722865 2026-03-23 8/400 2026-03-26 20:00 by 不吃魚的貓
[考研] 281求调剂 +3 亚克西good 2026-03-26 5/250 2026-03-26 19:48 by 不吃魚的貓
[考研] 0703化学/290求调剂/本科经历丰富/工科也可 +7 丹青奶盖 2026-03-26 7/350 2026-03-26 19:18 by macy2011
[考研] 22 350 本科985求调剂,求老登收留 +4 李轶男003 2026-03-20 4/200 2026-03-26 16:05 by 哇啦啦啦xtj
[考研] 一志愿 南京邮电大学 288分 材料考研 求调剂 +3 jl0720 2026-03-26 3/150 2026-03-26 13:39 by zzll406
[考研] 总分293求调剂 +6 加一一九 2026-03-25 8/400 2026-03-26 13:30 by yujianx
[考研] 生物技术与工程 +3 1294608413 2026-03-25 4/200 2026-03-25 18:02 by 1294608413
[考研] 0703化学求调剂 +6 奶油草莓. 2026-03-22 7/350 2026-03-25 10:00 by shangxh
[考研] 307求调剂 +3 余意卿 2026-03-21 6/300 2026-03-24 15:03 by 余意卿
[考研] 求调剂一志愿武汉理工大学材料工程(085601) +5 WW.' 2026-03-23 7/350 2026-03-24 14:50 by sprinining
[基金申请] 请教下大家 2026年国家基金申请是双盲审吗? +3 lishucheng1 2026-03-22 5/250 2026-03-24 08:22 by gltch
[考研] 生物学调剂 +5 Surekei 2026-03-21 5/250 2026-03-22 14:39 by tcx007
[考研] 269专硕求调剂 +6 金恩贝 2026-03-21 6/300 2026-03-22 14:31 by ColorlessPI
[考研] 材料 271求调剂 +5 展信悦_ 2026-03-21 5/250 2026-03-21 17:29 by 学员8dgXkO
[考研] 330求调剂0854 +3 assdll 2026-03-21 3/150 2026-03-21 13:01 by 搏击518
[考研] 332求调剂 +3 凤凰院丁真 2026-03-20 3/150 2026-03-21 10:27 by luoyongfeng
信息提示
请填处理意见