| 查看: 2022 | 回复: 2 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
[求助]
求助2个关于组蛋白的问题，与检测乙酰化和泛素化有关
|
||
|
没有做过组蛋白这方面，实验室其他师兄们也较少涉及，查文献上面基本都是略过... 然后我现在涉及的一个实验中要检测H3的乙酰化，和H2B的泛素化水平。有几个问题不解。 求检测这两者的protocol呀！！ koddisy@gmail.com 跪谢 然后我的问题如下： 1.第一个是组蛋白抽提的问题，用组蛋白试剂盒抽的组蛋白一般是抽得所有组蛋白，还是有不同的试剂盒，可以直接抽到H3？ 还是在设计的时候就已经加入纯化标签，比如H2B-FLAG，然后纯化H2B。。。我真不清楚~~ 2.乙酰化怎么检测，比如我要检测H3的global的乙酰化水平。又如果我要检测的只是H3K18的乙酰化可以实现吗？乙酰化也是买抗体检测吗？ 3.H2B的泛素化怎么检测？我看文献上是直接用泛素化抗体来检测的，是的嘛？ 实在是不清楚，请不要笑话我呢，我也是为了能顺利做实验~~~ 跪求protocol~~~不甚感激。现在满脑子的疑惑啊！！！ |
回复此楼» 猜你喜欢
281求调剂（0805）
已经有8人回复
-
环境领域全国重点实验室招收博士1-2名
已经有3人回复
-
材料专硕306英一数二
已经有10人回复
-
301求调剂
已经有6人回复
-
一志愿天津大学化学工艺专业（081702）315分求调剂
已经有7人回复
-
302求调剂
已经有6人回复
-
26博士申请
已经有3人回复
-
268求调剂
已经有3人回复
-
311求调剂
已经有10人回复
-
被我言中：新模板不强调格式了，假专家开始管格式了
已经有4人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 如何在蛋白纯化后去除6组氨酸(6His)标签
已经有17人回复
- 关于细胞实验是否必须要除盐和蛋白质透析的问题
已经有11人回复
- 关于Ni-NTA纯化蛋白
已经有19人回复
- 有关蛋白质信号转导的几个flash!
已经有74人回复
- 求助NMR溶剂问题
已经有11人回复
- 【PPT】组蛋白糖基化研究进展PPT
已经有37人回复
- 【求助/交流】蛋白质纯化的疑难问题
已经有11人回复
- 【求助/交流】关于his-tagged 蛋白纯化
已经有9人回复
- 【求助】关于NO和NO2气体的问题 求助高手
已经有7人回复
- 【求助/交流】请教一个his-tag蛋白质纯化问题
已经有9人回复
- 【求助】天然产物的乙酰化反应问题
已经有6人回复
chlorella409
木虫 (正式写手)
- BioEPI: 1
- 应助: 88 (初中生)
- 金币: 3245.6
- 散金: 1000
- 红花: 4
- 帖子: 376
- 在线: 182.4小时
- 虫号: 1600249
- 注册: 2012-02-05
- 性别: GG
- 专业: 蛋白质组学
3楼2012-03-26 14:09:50
【答案】应助回帖
感谢参与，应助指数 +1
|
大量样品测试，用快速检测组蛋白乙酰化的ELISA方法比较简单，这是南宁蓝光生物技术公司采用的方法： 1） 将处理的细胞（潜在HDAC inhibitor处理？）悬浮液在1.5mL离心管于3000转离心1分钟， 去调上清。 细胞pelet留下萃取组蛋白 2）用50 uL的0.1 N的HCL萃取5uL左右的离心沉淀的处理细胞pelet中的组蛋白。 用移液枪头反复上下吸放混细胞，以利细胞破裂和组蛋白释放。然后没隔5分钟vortex一次。连续3-4次后与12000转离心5分钟。 取含有组蛋白的上清液。（组蛋白是碱性蛋白，在0.1N盐酸下带强正电荷而高度溶于水。 其他细胞蛋白基本因此变性而沉淀。这种萃取方法的总组蛋白纯度可达50%以上）。 3 ）用移液枪在96孔板加80uL/well的0.2M的Na2CO3。 然后孔中加20uL在2）中萃取的组蛋白上清。要慢，防止CO2的突然冒出。于37度孵化30分钟。 4）倒掉孔中溶液，加100uL/well的1%BSA in PBSt。 封闭30分钟 5）用PBSt清洗well 4次， 加入0.25 ug/mL的抗乙酰赖氨酸抗体HRP标记（用1%BSA in PBSt稀释）于室温孵化30分钟。 6）倒掉孔中溶液，用PBSt清洗 4次。 然后加100uL/well的HRP底物TMB显色。组蛋白的乙酰化程度与颜色成正比。 抗乙酰化赖氨酸抗体HRP和TMB， 及各种乙酰化蛋白组学所需抗体及填料在国内的南宁蓝光生物技术（www.bl-biotech.com) 均有售。 |
2楼2012-03-26 10:55:21
