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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 胞内酶不能用超声破碎怎么办？
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ss000qq

金虫 (正式写手)

[求助] 胞内酶不能用超声破碎怎么办？

大家好：
       最近做实验遇到一个问题，就是我重组的蛋白属于胞内酶，但最近诱导破碎菌体再跑SDS-PAGE蛋白胶发现，没有目的蛋白，而用诱导后的菌液直接上样的则有目的条带，难道我这个酶太容易变性？破碎完一经离心，变性的蛋白随之沉底，而留下上样的上清则没有东西？
       我用的是T7表达载体，不知道和这种现象有没有关联？不知大家有没有遇到过这种情况啊？急求解答！谢谢
       备注：破碎条件我采用的是P=50%，破2秒，停5秒，总时间1分钟时拿出冷却。还有一点是我的蛋白的诱导表达量不是很高，因为还未经诱导条件的优化。使用IPTG诱导的，宿舍菌为BL21.
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1楼 2012-02-29 19:46:04
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whb21

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
建议你做些对照试验，诱导后菌液离心上清和沉淀分别跑一下胶，看看是否蛋白全在沉淀中，如果那样的话就比较麻烦，还得进行包涵体变性复性...
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3楼2012-03-01 09:53:10
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linsaijun

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
很可能是形成包涵体了。
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NopainNoGain!
2楼2012-02-29 21:25:05
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ss000qq

金虫 (正式写手)
引用回帖:
楼: Originally posted by whb21 at 2012-03-01 09:53:10:
建议你做些对照试验，诱导后菌液离心上清和沉淀分别跑一下胶，看看是否蛋白全在沉淀中，如果那样的话就比较麻烦，还得进行包涵体变性复性...

请问在我做的这个试验中为什么会形成包涵体啊？是哪个环节造成的啊？谢谢
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4楼2012-03-01 13:57:05
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ss000qq

金虫 (正式写手)
引用回帖:
楼: Originally posted by linsaijun at 2012-02-29 21:25:05:
很可能是形成包涵体了。

请问在我这个试验中哪个环节导致形成了包涵体啊？以前没接触过包涵体的情况。谢谢
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5楼2012-03-01 13:59:39
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