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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 小鼠胚胎培养液KSOM的问题
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闺闺love

铜虫 (初入文坛)

[求助] 小鼠胚胎培养液KSOM的问题

KSOM好像只有Millipore有是吗？不知道Millipore怎么回事，现在订药品总是很不给力的老是订不上。我想自己配KSOM呢，但是照着《小鼠胚胎操作》那本书上的配方配出来的液体效果不理想。不知各位有KSOM的比较成熟的配方吗？谢谢！
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1楼 2012-02-28 13:52:00
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stfoxst

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
闺闺love: 金币+2, ★有帮助 2012-03-19 19:01:31
书上的配方没问题，我们培养受精卵囊胚率可以达到100%。
如果要优化，BSA可以加到6或8，效果非常好。
不知道你用的是什么试剂，必须用Sigma和Gibco。水质也非常重要。胚胎对这个还是很敏感的。
小鼠本身饲养条件也是必须控制的。
不知道你说的效果不理想是指什么。阻滞、发育不好、胚胎质量差？
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AndGodsaid,Lettherebelight:andtherewaslight.
2楼2012-03-18 23:16:25
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闺闺love

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by stfoxst at 2012-03-18 23:16:25:
书上的配方没问题，我们培养受精卵囊胚率可以达到100%。
如果要优化，BSA可以加到6或8，效果非常好。
不知道你用的是什么试剂，必须用Sigma和Gibco。水质也非常重要。胚胎对这个还是很敏感的。
小鼠本身饲养条 ...

我完全按照书上的配过一次，细胞发育停滞且皱缩，皱缩有可能是渗透压的问题，配完液体确实没测渗透压。试剂都是sigma的，水应该也没问题呢。不过，现在已经在millipore订了ksom了，只是还没到货，在等呢，很慢！
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3楼2012-03-19 19:08:25
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stfoxst

银虫 (小有名气)
★ ★ ★
telomerase: 金币+3, 谢谢你的热心应助，分享经验！！！ 2012-03-20 09:27:33
引用回帖:
3楼: Originally posted by 闺闺love at 2012-03-19 19:08:25:
我完全按照书上的配过一次，细胞发育停滞且皱缩，皱缩有可能是渗透压的问题，配完液体确实没测渗透压。试剂都是sigma的，水应该也没问题呢。不过，现在已经在millipore订了ksom了，只是还没到货，在等呢，很慢！

如果有阻滞肯定是某个成分有问题。
我们也不测渗透压，没必要。
PH第一次调完后，要放到培养箱2-4h，拿出来再调到7.5。
这样找原因太困难了。其实最好的办法是你找一个实验室，去跟着做一次，养到囊胚。以后就能做好了。
我们实验室的师弟师妹开始也会遇到这种问题，跟着做一两次就好了，也说不上到底错误出在哪里。不过倒是有人配的液体一加酚红就是紫的，那肯定是某个成分加错了，应该是黄色。
要是特别有钱买也无所谓啦。除了KSOM，G1/G2更好用。有钱就买这个吧。
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AndGodsaid,Lettherebelight:andtherewaslight.
4楼2012-03-20 00:04:38
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timmychina

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by stfoxst at 2012-03-18 23:16:25:
书上的配方没问题，我们培养受精卵囊胚率可以达到100%。
如果要优化，BSA可以加到6或8，效果非常好。
不知道你用的是什么试剂，必须用Sigma和Gibco。水质也非常重要。胚胎对这个还是很敏感的。
小鼠本身饲养条 ...

请问你们体外培养囊赔率达到100%，是从几细胞期开始培养的？培养基是自己配制还是购买？
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彩云之南的愿望还能实现吗
5楼2012-04-20 11:37:04
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stfoxst

银虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by timmychina at 2012-04-20 11:37:04:
请问你们体外培养囊赔率达到100%，是从几细胞期开始培养的？培养基是自己配制还是购买？

是从受精卵开始的，也就是1细胞期。
培养液是我们自己配制的KSOM。
现在的小鼠胚胎体外培养体系已经很成熟了，各方面条件控制好的话，达到100%的囊胚率很正常，文献中也有相关的报道。
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AndGodsaid,Lettherebelight:andtherewaslight.
6楼2012-04-23 17:00:33
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闺闺love

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by stfoxst at 2012-03-20 00:04:38:
如果有阻滞肯定是某个成分有问题。
我们也不测渗透压，没必要。
PH第一次调完后，要放到培养箱2-4h，拿出来再调到7.5。
这样找原因太困难了。其实最好的办法是你找一个实验室，去跟着做一次，养到囊胚。以后就 ...

G1/G2也是培养液吗？请问是哪个公司的？
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7楼2012-05-05 15:43:10
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闺闺love

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by stfoxst at 2012-04-23 17:00:33:
是从受精卵开始的，也就是1细胞期。
培养液是我们自己配制的KSOM。
现在的小鼠胚胎体外培养体系已经很成熟了，各方面条件控制好的话，达到100%的囊胚率很正常，文献中也有相关的报道。

现在ksom还是不好定，暂时用M16代替着
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8楼2012-05-05 15:44:09
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stfoxst

银虫 (小有名气)
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7楼: Originally posted by 闺闺love at 2012-05-05 15:43:10:
G1/G2也是培养液吗？请问是哪个公司的？

vitrolife的。做辅助生殖的都用，应该好定到。
M16用于培养效果一般，实在不行可以试试CZB，2cell前用低糖的CZB，过了2cell换成高糖的，这个培养基效果也很好。
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AndGodsaid,Lettherebelight:andtherewaslight.
9楼2012-05-08 11:13:14
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闺闺love

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by stfoxst at 2012-05-08 11:13:14:
vitrolife的。做辅助生殖的都用，应该好定到。
M16用于培养效果一般，实在不行可以试试CZB，2cell前用低糖的CZB，过了2cell换成高糖的，这个培养基效果也很好。

我想订millipore的ksom是因为他有种产品不含BSA，不知M16、czb都含BSA呢，现在还是订不到ksom，很着急呢。我准备自己按书上的配方先配了，看看效果。
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10楼2012-05-09 16:59:30
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