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闺闺love

铜虫 (初入文坛)

[求助] 小鼠胚胎培养液KSOM的问题

KSOM好像只有Millipore有是吗?不知道Millipore怎么回事,现在订药品总是很不给力的老是订不上。我想自己配KSOM呢,但是照着《小鼠胚胎操作》那本书上的配方配出来的液体效果不理想。不知各位有KSOM的比较成熟的配方吗?谢谢!
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stfoxst

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
闺闺love: 金币+2, 有帮助 2012-03-19 19:01:31
书上的配方没问题,我们培养受精卵囊胚率可以达到100%。
如果要优化,BSA可以加到6或8,效果非常好。
不知道你用的是什么试剂,必须用Sigma和Gibco。水质也非常重要。胚胎对这个还是很敏感的。
小鼠本身饲养条件也是必须控制的。
不知道你说的效果不理想是指什么。阻滞、发育不好、胚胎质量差?
AndGodsaid,Lettherebelight:andtherewaslight.
2楼2012-03-18 23:16:25
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闺闺love

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by stfoxst at 2012-03-18 23:16:25:
书上的配方没问题,我们培养受精卵囊胚率可以达到100%。
如果要优化,BSA可以加到6或8,效果非常好。
不知道你用的是什么试剂,必须用Sigma和Gibco。水质也非常重要。胚胎对这个还是很敏感的。
小鼠本身饲养条 ...

我完全按照书上的配过一次,细胞发育停滞且皱缩,皱缩有可能是渗透压的问题,配完液体确实没测渗透压。试剂都是sigma的,水应该也没问题呢。不过,现在已经在millipore订了ksom了,只是还没到货,在等呢,很慢!
3楼2012-03-19 19:08:25
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stfoxst

银虫 (小有名气)

★ ★ ★
telomerase: 金币+3, 谢谢你的热心应助,分享经验!!! 2012-03-20 09:27:33
引用回帖:
3楼: Originally posted by 闺闺love at 2012-03-19 19:08:25:
我完全按照书上的配过一次,细胞发育停滞且皱缩,皱缩有可能是渗透压的问题,配完液体确实没测渗透压。试剂都是sigma的,水应该也没问题呢。不过,现在已经在millipore订了ksom了,只是还没到货,在等呢,很慢!

如果有阻滞肯定是某个成分有问题。
我们也不测渗透压,没必要。
PH第一次调完后,要放到培养箱2-4h,拿出来再调到7.5。
这样找原因太困难了。其实最好的办法是你找一个实验室,去跟着做一次,养到囊胚。以后就能做好了。
我们实验室的师弟师妹开始也会遇到这种问题,跟着做一两次就好了,也说不上到底错误出在哪里。不过倒是有人配的液体一加酚红就是紫的,那肯定是某个成分加错了,应该是黄色。
要是特别有钱买也无所谓啦。除了KSOM,G1/G2更好用。有钱就买这个吧。
AndGodsaid,Lettherebelight:andtherewaslight.
4楼2012-03-20 00:04:38
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timmychina

铁杆木虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by stfoxst at 2012-03-18 23:16:25:
书上的配方没问题,我们培养受精卵囊胚率可以达到100%。
如果要优化,BSA可以加到6或8,效果非常好。
不知道你用的是什么试剂,必须用Sigma和Gibco。水质也非常重要。胚胎对这个还是很敏感的。
小鼠本身饲养条 ...

请问你们体外培养囊赔率达到100%,是从几细胞期开始培养的?培养基是自己配制还是购买?
彩云之南的愿望还能实现吗
5楼2012-04-20 11:37:04
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stfoxst

银虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by timmychina at 2012-04-20 11:37:04:
请问你们体外培养囊赔率达到100%,是从几细胞期开始培养的?培养基是自己配制还是购买?

是从受精卵开始的,也就是1细胞期。
培养液是我们自己配制的KSOM。
现在的小鼠胚胎体外培养体系已经很成熟了,各方面条件控制好的话,达到100%的囊胚率很正常,文献中也有相关的报道。
AndGodsaid,Lettherebelight:andtherewaslight.
6楼2012-04-23 17:00:33
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闺闺love

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by stfoxst at 2012-03-20 00:04:38:
如果有阻滞肯定是某个成分有问题。
我们也不测渗透压,没必要。
PH第一次调完后,要放到培养箱2-4h,拿出来再调到7.5。
这样找原因太困难了。其实最好的办法是你找一个实验室,去跟着做一次,养到囊胚。以后就 ...

G1/G2也是培养液吗?请问是哪个公司的?
7楼2012-05-05 15:43:10
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闺闺love

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by stfoxst at 2012-04-23 17:00:33:
是从受精卵开始的,也就是1细胞期。
培养液是我们自己配制的KSOM。
现在的小鼠胚胎体外培养体系已经很成熟了,各方面条件控制好的话,达到100%的囊胚率很正常,文献中也有相关的报道。

现在ksom还是不好定,暂时用M16代替着
8楼2012-05-05 15:44:09
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stfoxst

银虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 闺闺love at 2012-05-05 15:43:10:
G1/G2也是培养液吗?请问是哪个公司的?

vitrolife的。做辅助生殖的都用,应该好定到。
M16用于培养效果一般,实在不行可以试试CZB,2cell前用低糖的CZB,过了2cell换成高糖的,这个培养基效果也很好。
AndGodsaid,Lettherebelight:andtherewaslight.
9楼2012-05-08 11:13:14
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闺闺love

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
9楼: Originally posted by stfoxst at 2012-05-08 11:13:14:
vitrolife的。做辅助生殖的都用,应该好定到。
M16用于培养效果一般,实在不行可以试试CZB,2cell前用低糖的CZB,过了2cell换成高糖的,这个培养基效果也很好。

我想订millipore的ksom是因为他有种产品不含BSA,不知M16、czb都含BSA呢,现在还是订不到ksom,很着急呢。我准备自己按书上的配方先配了,看看效果。
10楼2012-05-09 16:59:30
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