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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » overlap PCR之问题
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tyw2623

金虫 (小有名气)

[交流] overlap PCR之问题

各位，我最近在连基因A（700bp左右）和基因B（700bp左右），重叠的连个引物为48bp，连个基因各占24bp。当做重叠PCR时，在1400bp处有条带（在我用的marker-D 1000bp和2000bp间的条带）当然也有其他的杂带。我将此1400bp的带回收后，以此为模板，用头尾引物扩增，每次都是1400bp处条带很暗，而在700bp处条带很亮。我用回收的1400bp做模板时，分别扩基因A和基因B却又能扩出来很明显的A和B，这不是证明了我回收的1400bp为连接上的基因吗  ，可为什么用头尾引物扩1400本身却扩不出来呢？
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1楼 2012-02-27 19:52:05
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imyting

至尊木虫 (正式写手)
★
tyw2623(金币+1):谢谢参与
问题可能是你的PCR条件了，毕竟1400和700延伸需要的时间是不同的
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10楼2012-02-28 15:18:46
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