应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » T7载体的IPTG诱导
51/1返回列表
查看: 4558  |  回复: 10
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

ss000qq

金虫 (正式写手)

[求助] T7载体的IPTG诱导

大家好！
      我在做基因克隆，载体用的是T7载体，由于克隆的基因较多，所以蛋白诱导方面比较麻烦。可能每个基因所表达蛋白的条件都不一样，我现在想粗略的看一下诱导时间和温度以及诱导剂添加量对诱导的影响，我用的诱导剂是IPTG。我想请教一下一般IPTG在温度，时间，用量上有没有通用的范围或规则？我有看过文献报道，说T7载体用IPTG诱导会容易形成包涵体。
      而且我现在是粗略的诱导检测有无蛋白表达，所以并没有在OD=0.6-0.8时诱导，而且诱导一般是过夜诱的，诱导温度20℃，不知会否对这种载体的诱导有影响？
      我的宿主细胞是BL21. 请同行高手给与指教！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-02-23 18:52:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

weilson

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

ss000qq(金币+2): ★★★很有帮助 谢谢 2012-02-25 13:58:20
（2）异源表达，真核糖蛋白无法糖基化使中间体溶解度下降；（3）重组蛋白中硫氨酸含量多，导致包涵体形成 （4）重组蛋白分泌序列存在阻碍折叠
赞一下 回复此楼
9楼2012-02-24 22:01:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答

qjy_134

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
amisking(金币+2): 鼓励积极应助！ 2012-02-23 20:46:42
ss000qq(金币+1): ★有帮助 谢谢 2012-02-25 13:59:57
你用1ml TB 培养基（用那种透气好一点的试管），挑2-3个菌落，37@250rpm培养个2-3个小时（菌看上去浑浊了），加IPTG终浓度1mM.再培养个2个小时，电泳看结果
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2012-02-23 20:33:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ss000qq

金虫 (正式写手)
引用回帖:
楼: Originally posted by qjy_134 at 2012-02-23 20:33:17:
你用1ml TB 培养基（用那种透气好一点的试管），挑2-3个菌落，37@250rpm培养个2-3个小时（菌看上去浑浊了），加IPTG终浓度1mM.再培养个2个小时，电泳看结果

你的诱导温度不调吗？还是高温诱导？
赞一下 回复此楼
3楼2012-02-23 21:16:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
如果只是看能不能表达，不涉及的到表达出来的有没有活性的问题，1mMIPTG，37度2个小时就可以检测的。
赞一下 回复此楼
4楼2012-02-23 21:30:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 基金啊基金 +3 longfie172 2026-08-20 3/150 2026-08-21 00:04 by wuchongjun
[基金申请] 让我中一个面上吧！ +8 大萍1987 2026-08-20 10/500 2026-08-20 21:48 by 大萍1987
[基金申请] 今天系统多次维护，明天很可能放榜！ +10 zju2000 2026-08-16 11/550 2026-08-20 20:02 by cl479861084
[基金申请] 时间戳变了，能看出什么问题？ +18 基诺咪客 2026-08-17 23/1150 2026-08-20 17:19 by Godzela
[基金申请] 放榜前的不淡定 40+3 snowwithsea 2026-08-19 12/600 2026-08-20 15:56 by lfy8008
[基金申请] filecode，4个jtjc了 +11 ziyangfang 2026-08-19 13/650 2026-08-19 21:28 by aasahr
[教师之家] 为什么余额宝的年化利率越来越低？主要原因有哪些？ +5 瞬息宇宙 2026-08-15 5/250 2026-08-19 20:23 by super2002521
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +4 yuleib84 2026-08-19 5/250 2026-08-19 19:52 by hhs666
[基金申请] 今天放榜吗？ +14 布布和一二 2026-08-19 15/750 2026-08-19 18:07 by gltch
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +10 wangze12014 2026-08-14 12/600 2026-08-19 16:56 by 苦难博士
[基金申请] 2027广东省杰青 +4 奶牛小黑 2026-08-15 10/500 2026-08-19 11:02 by wanfengnew
[基金申请] 朋友圈看到的 +6 wangzilk 2026-08-18 8/400 2026-08-19 10:55 by Haru815
[基金申请] 什么时候开奖？ +6 CrisMessi 2026-08-18 6/300 2026-08-19 08:06 by Equinoxhua
[基金申请] 明天放榜？ +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
[论文投稿] 投稿咨询 +4 wwm09 2026-08-17 6/300 2026-08-18 15:36 by wwm09
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +14 archvillain 2026-08-15 26/1300 2026-08-18 13:37 by phantomgost
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +4 且听虎啸 2026-08-17 5/250 2026-08-18 00:49 by 蔡棒棒菂
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +6 angus9576 2026-08-17 11/550 2026-08-17 23:57 by angus9576
[精细化工] 招聘 金属平磨液，抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭