应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » T7载体的IPTG诱导
51/1返回列表
查看: 3802  |  回复: 10
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

ss000qq

金虫 (正式写手)

[求助] T7载体的IPTG诱导

大家好！
      我在做基因克隆，载体用的是T7载体，由于克隆的基因较多，所以蛋白诱导方面比较麻烦。可能每个基因所表达蛋白的条件都不一样，我现在想粗略的看一下诱导时间和温度以及诱导剂添加量对诱导的影响，我用的诱导剂是IPTG。我想请教一下一般IPTG在温度，时间，用量上有没有通用的范围或规则？我有看过文献报道，说T7载体用IPTG诱导会容易形成包涵体。
      而且我现在是粗略的诱导检测有无蛋白表达，所以并没有在OD=0.6-0.8时诱导，而且诱导一般是过夜诱的，诱导温度20℃，不知会否对这种载体的诱导有影响？
      我的宿主细胞是BL21. 请同行高手给与指教！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-02-23 18:52:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhiqiang5070

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
小丹木木(金币+2): 鼓励应助 2012-02-24 10:49:26
貌似T7启动子IPTG用0.4mM就能诱导出来，T7lac才需要1mM。温度一般只会影响它的可溶性吧和产速。OD600在0.4-1都行的。至于包涵体跟你的片段长度和你选择的载体有关，融合表达和带有信号肽的载体容易可溶表达
赞一下 回复此楼
无善无恶心之体
6楼2012-02-24 09:43:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答

qjy_134

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
amisking(金币+2): 鼓励积极应助！ 2012-02-23 20:46:42
ss000qq(金币+1): ★有帮助 谢谢 2012-02-25 13:59:57
你用1ml TB 培养基（用那种透气好一点的试管），挑2-3个菌落，37@250rpm培养个2-3个小时（菌看上去浑浊了），加IPTG终浓度1mM.再培养个2个小时，电泳看结果
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2012-02-23 20:33:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ss000qq

金虫 (正式写手)
引用回帖:
楼: Originally posted by qjy_134 at 2012-02-23 20:33:17:
你用1ml TB 培养基（用那种透气好一点的试管），挑2-3个菌落，37@250rpm培养个2-3个小时（菌看上去浑浊了），加IPTG终浓度1mM.再培养个2个小时，电泳看结果

你的诱导温度不调吗？还是高温诱导？
赞一下 回复此楼
3楼2012-02-23 21:16:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
如果只是看能不能表达，不涉及的到表达出来的有没有活性的问题，1mMIPTG，37度2个小时就可以检测的。
赞一下 回复此楼
4楼2012-02-23 21:30:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料与化工求调剂 +3 为学666 2026-03-16 3/150 2026-03-16 15:09 by 加号+
[考研] 285求调剂 +6 ytter 2026-03-12 6/300 2026-03-16 15:05 by njzyff
[考研] 0703化学调剂 290分有科研经历，论文在投 +7 腻腻gk 2026-03-14 7/350 2026-03-16 10:12 by houyaoxu
[教师之家] 焦虑 +7 水冰月月野兔 2026-03-13 9/450 2026-03-16 10:00 by Quakerbird
[考研] 材料工程专硕274一志愿211求调剂 +5 薛云鹏 2026-03-15 5/250 2026-03-15 20:38 by Logic2024
[考博] 欢迎申博同学联系 +3 天道酬勤2026686 2026-03-10 7/350 2026-03-15 19:03 by 天道酬勤2026686
[考研] 本科南京大学一志愿川大药学327 +3 麦田耕者 2026-03-14 3/150 2026-03-14 20:04 by 外星文明
[考研] 中科大材料专硕319求调剂 +3 孟鑫材料 2026-03-13 3/150 2026-03-14 18:10 by houyaoxu
[考研] 265求调剂 +4 威化饼07 2026-03-12 4/200 2026-03-14 17:23 by userper
[考研] 290求调剂 +4 @将就将就看 2026-03-10 8/400 2026-03-14 14:23 by 千千运气
[基金申请] 有必要更换申报口吗 20+3 fannyamoy 2026-03-11 3/150 2026-03-14 00:52 by zhanghaozhu
[考研] 308求调剂 +3 是Lupa啊 2026-03-10 3/150 2026-03-14 00:30 by JourneyLucky
[考研] 341求调剂 +3 番茄头--- 2026-03-10 3/150 2026-03-13 23:07 by JourneyLucky
[考研] 求材料调剂 +5 隔壁陈先生 2026-03-12 5/250 2026-03-13 22:03 by 星空星月
[考研] 290求调剂 +9 ADT 2026-03-11 9/450 2026-03-13 21:55 by JourneyLucky
[考研] 310求调剂 +3 【上上签】 2026-03-11 3/150 2026-03-13 16:16 by JourneyLucky
[考研] 【0856】化学工程（085602）313 分，本科学科评估A类院校化学工程与工艺，诚求调剂 +7 小刘快快上岸 2026-03-11 7/350 2026-03-13 16:06 by ruiyingmiao
[考研] 328化工专硕求调剂 +4 。，。，。，。i 2026-03-12 4/200 2026-03-13 14:44 by JourneyLucky
[考研] 308求调剂 +3 是Lupa啊 2026-03-12 3/150 2026-03-13 14:30 by 求调剂zz
[考研] 求调剂材料专硕293 +6 段_(:з」∠)_ 2026-03-10 6/300 2026-03-10 18:22 by ms629
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭