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求PCR实验流程，小弟是个新手求高手相助
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blackrose8089
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2楼2012-02-12 13:35:28
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tuobaohua
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PCR 体系： 药品 体积（μl） 水 6 Buffer 1 dNTP 0.2 Mg2+cl 0.2 引物（F） 0.5 （R） 0.5 Taq酶 0.1 DNA 1.5 顺序： 水 + Buffer + dNTP + Mg+cl + 引物（F、R） + Taq酶（冰盒，液面下） + 离心混样 + DNA + 离心混样 + 矿物油（10μl竖直滴加）。 PCR： 绿： F1 Enter gax PCR体系(50--25) Run Begin 蓝：Run A Enter 02 SSR Active-Siim Enter 管数（96-x） PCR体系(25-10) 亮 聚丙烯酰胺凝胶电泳： 封口：琼脂糖凝胶封口，两槽30ml 插板后，封住长玻璃板底部，凝固后插进电泳槽。 胶：（配方为50ml两板80ml） 聚丙烯酰胺：20ml，水：25ml，10xTBE,APS(过硫酸铵)：500μl，TEMED：50μl。 顺序：（剧毒）聚丙烯酰胺，10x TBE，水，APS、TEMED,后两样灌胶之前再加入，混匀。 过程：（贴壁）灌满灌胶，有气泡用针头吹，插梳子，如果漏胶，用枪补胶。凝固后，倒入0.5x TBE，中间部分，没过短玻璃，不到长玻璃，两边没过导电管，抜梳子，用针头吹气泡。 点样：PCR后加入6x的加样缓冲液（3.5μl溴酚蓝），点样。 染色所需药品： 固定液：450ml水 + 50ml无水乙醇（95%）+ 2.5ml冰醋酸。 硝酸银：500ml水 + 1g AgNO3(固体，可多不可少)。 硫代硫酸钠：500ml水 + 120μl 10%Na2S2O3溶液（染色前配，易变质）。 显色剂： 500ml水 + 7.5g NaOH + 1.5ml甲醛。 染色顺序： 1、固定（12min） 2、水洗（1次，可无） 3、银染（12min） 4、 Na2S2O3（溶液由无色-棕黄色，不能太深） 5、显色剂（有清晰的带，10min左右） 6、固定液（6-12min） 7、水洗，包膜，拍照 |
9楼2012-02-22 04:42:04
10楼2012-02-22 10:36:36
