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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求PCR实验流程，小弟是个新手求高手相助
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楼1970-01-01 08:00:00
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智能机器人

Robot (super robot)

我们都爱小木虫

找到一些相关的精华帖子，希望有用哦~

科研从小木虫开始，人人为我，我为人人

kidluag

金虫 (正式写手)

不自信的师生
PCR 体系：        
药品          体积（μl）
水               6
Buffer            1
dNTP            0.2
Mg2+cl           0.2
引物（F）       0.5
    （R）       0.5
Taq酶           0.1
DNA            1.5
顺序：
        水 + Buffer + dNTP + Mg+cl + 引物（F、R） + Taq酶（冰盒，液面下） + 离心混样 + DNA + 离心混样 + 矿物油（10μl竖直滴加）。
PCR：
绿： F1  Enter  gax  PCR体系(50--25)  Run  Begin
蓝：Run A Enter  02 SSR  Active-Siim    Enter  管数（96-x）  PCR体系(25-10)  亮
聚丙烯酰胺凝胶电泳：
封口：琼脂糖凝胶封口，两槽30ml
      插板后，封住长玻璃板底部，凝固后插进电泳槽。
胶：（配方为50ml两板80ml）
聚丙烯酰胺：20ml，水：25ml，10xTBE,APS(过硫酸铵)：500μl，TEMED：50μl。
顺序：（剧毒）聚丙烯酰胺，10x TBE，水，APS、TEMED,后两样灌胶之前再加入，混匀。
过程：（贴壁）灌满灌胶，有气泡用针头吹，插梳子，如果漏胶，用枪补胶。凝固后，倒入0.5x TBE，中间部分，没过短玻璃，不到长玻璃，两边没过导电管，抜梳子，用针头吹气泡。
点样：PCR后加入6x的加样缓冲液（3.5μl溴酚蓝），点样。
染色所需药品：
        固定液：450ml水 + 50ml无水乙醇（95%）+ 2.5ml冰醋酸。
        硝酸银：500ml水 + 1g AgNO3(固体，可多不可少)。
        硫代硫酸钠：500ml水 + 120μl 10%Na2S2O3溶液（染色前配，易变质）。
        显色剂： 500ml水 + 7.5g NaOH + 1.5ml甲醛。
染色顺序：
1、固定（12min）  2、水洗（1次，可无） 3、银染（12min） 4、 Na2S2O3（溶液由无色-棕黄色，不能太深）  5、显色剂（有清晰的带，10min左右）  6、固定液（6-12min）  7、水洗，包膜，拍照
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被迫的无知小小博
9楼2012-02-22 04:42:04
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blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
百度上搜一下，一堆堆的！
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jiayoubashaonian
2楼2012-02-12 13:35:28
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yanggeng

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
看天(金币+2): 鼓励回答 2012-02-12 17:12:57
多试验几次就非常简单了，建议用primer premier设计引物。
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3楼2012-02-12 14:11:43
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小猫三两只

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
看天(金币+2): 鼓励交流 2012-02-12 17:12:49
笼统的说就是先设计引物，合成引物，配体系，PCR扩增，检测就行了。具体的细节，你实验室应该很多师兄师姐都做过吧，可以问问他们。多做几次就熟练了。
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4楼2012-02-12 14:49:08
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