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森林有木

银虫 (初入文坛)

[求助] 关于ssr开发问题

刚做微卫星的开发,我用的是磁珠富集法,磁珠富集后的产物pcr30个循环,结果发现条带不是很亮,不知道哪位大侠做过这发面的,有没有遇到过这种情况,感觉是前面洗脱次数太多了还是没杂交好还是别的什么原因,想请教一下各位大侠,在下感激不尽

右边的三个是富集后的pcr电泳图
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liugs

禁虫 (正式写手)

感谢参与,应助指数 +1
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2楼2012-02-09 17:29:53
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liugs

禁虫 (正式写手)


西瓜(金币+1): 鼓励热心交流 2012-02-09 22:18:57
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3楼2012-02-09 17:30:32
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森林有木

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
: Originally posted by liugs at 2012-02-09 17:29:53:
可以直接做连接克隆!

嗯 可是就是觉得淡了点 他们做的可亮了 不解 一样的方法
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4楼2012-02-09 17:43:15
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森林有木

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
: Originally posted by liugs at 2012-02-09 17:30:32:
但是,不确定是否富集到需要的片段!

里面应该有重复序列的片段 只是不知道有多少额
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5楼2012-02-09 17:45:03
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liugs

禁虫 (正式写手)

森林有木(金币+2): ★★★很有帮助 2012-02-10 13:01:27
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6楼2012-02-10 10:02:20
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森林有木

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
: Originally posted by liugs at 2012-02-10 10:02:20:
亮度不能说明问题,我做的是富集之后扩增5-10个循环,亮度也不高,但是富集效率挺高的!

哦,亮度不高的话就不能做纯化了,直接连接可以吗?
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7楼2012-02-10 13:00:37
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firsky

金虫 (小有名气)

对照marker的亮度,这个应该可以吧
纯化不能省,杂质会影响酶活性
8楼2012-02-10 14:07:08
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森林有木

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
: Originally posted by firsky at 2012-02-10 14:07:08:
对照marker的亮度,这个应该可以吧
纯化不能省,杂质会影响酶活性

就怕浓度不高纯化后就没了,上次我没纯化的菌长得好好地,纯化的反而不长菌,郁闷呐
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9楼2012-02-10 14:59:12
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liugs

禁虫 (正式写手)

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10楼2012-02-10 18:02:27
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