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森林有木

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[求助] 关于ssr开发问题

刚做微卫星的开发，我用的是磁珠富集法，磁珠富集后的产物pcr30个循环，结果发现条带不是很亮，不知道哪位大侠做过这发面的，有没有遇到过这种情况，感觉是前面洗脱次数太多了还是没杂交好还是别的什么原因，想请教一下各位大侠，在下感激不尽

右边的三个是富集后的pcr电泳图

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1楼 2012-02-09 13:39:55

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liugs

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2楼2012-02-09 17:29:53

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liugs

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西瓜(金币+1): 鼓励热心交流 2012-02-09 22:18:57

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3楼2012-02-09 17:30:32

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森林有木

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楼: Originally posted by liugs at 2012-02-09 17:29:53:
可以直接做连接克隆！

嗯可是就是觉得淡了点他们做的可亮了不解一样的方法

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4楼2012-02-09 17:43:15

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楼: Originally posted by liugs at 2012-02-09 17:30:32:
但是，不确定是否富集到需要的片段！

里面应该有重复序列的片段只是不知道有多少额

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5楼2012-02-09 17:45:03

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liugs

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森林有木(金币+2): ★★★很有帮助 2012-02-10 13:01:27

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6楼2012-02-10 10:02:20

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楼: Originally posted by liugs at 2012-02-10 10:02:20:
亮度不能说明问题，我做的是富集之后扩增5-10个循环，亮度也不高，但是富集效率挺高的！

哦，亮度不高的话就不能做纯化了，直接连接可以吗？

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7楼2012-02-10 13:00:37

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firsky

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对照marker的亮度，这个应该可以吧
纯化不能省，杂质会影响酶活性

8楼2012-02-10 14:07:08

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楼: Originally posted by firsky at 2012-02-10 14:07:08:
对照marker的亮度，这个应该可以吧
纯化不能省，杂质会影响酶活性

就怕浓度不高纯化后就没了，上次我没纯化的菌长得好好地，纯化的反而不长菌，郁闷呐

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9楼2012-02-10 14:59:12

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liugs

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10楼2012-02-10 18:02:27

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