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普弟

木虫 (正式写手)

[求助] 氨基柱,65%乙腈-35%磷酸二氢钾缓冲盐,基线不稳以及出峰位置后移

氨基柱,65%乙腈-35%磷酸二氢钾缓冲盐,走基线的时候,吸收一直往下降,然后柱压也不稳定,会不会是缓冲盐会析出来呢?

测样品的时候,标准图谱是17分钟出峰,但是我的峰竟然是到40分钟出来,而且基线也一直往下走,是什么原因呢?应该如何解决?

操作的过程是:90%乙腈-10%水过渡到65%乙腈-35%水 走1h,后面再走流动相。

柱压不稳应该有什么原因呢?

希望诸位老师和同学能够多多指点!谢谢!

[ Last edited by 普弟 on 2012-2-8 at 18:19 ]
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muyou

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
7楼: Originally posted by nrzhw at 2012-02-08 22:55:46:
缓冲盐浓度有点高了,65%乙腈-35%磷酸二氢钾缓冲盐体系中,缓冲盐的总浓度换算出来是0.0175mol/L,而磷酸二氢钾在乙腈中的溶解度极低,因此原因肯能就是缓冲盐析出来了。
不妨做个预实验,可以试一下在一个烧杯 ...

这个比例和浓度的流动相应该是没有问题的,年前我也用氨基柱流动相恰好也是这个,做了近一个月时间没有出现缓冲盐析出的问题,不过氨基柱特别是新氨基柱不好平衡是真的,我们新买的柱子第一次用也是很久(4-5小时)也不平衡,用过几次以后,流动相每天仍需要平衡1-2小时。建议楼主先换上同比例的乙腈水0.6ml/min平衡一个小时左右,然后重新配流动相,过滤,超声,也是先低流速平衡再调至1ml/min 多平衡一会儿试试。
9楼2012-02-09 09:10:38
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查看全部 13 个回答

笨笨的宝贝

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与,应助指数 +1
xiaoxiao270(金币+1): 3Q 2012-02-08 20:45:57
普弟(金币+5): ★★★很有帮助 谢谢! 2012-02-08 21:39:00
是新柱子吗,如果是新柱子的话,看看柱子出厂时装的溶剂是正向的还是反向的,是否需要置换,新的氨基柱处理起来很麻烦的,要是不是新的话,估计是填料已经不行了...
总有那么一个想要遗忘,却又念念不忘的人.....
2楼2012-02-08 18:29:53
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nrzhw

铁杆木虫 (著名写手)

★
xiaoxiao270(金币+1): 3Q 2012-02-09 11:40:10
1.正如楼上所说,柱子如果已经旧了,或者是平时的处理方法不得当,都会造成氨基柱的损坏,出现像柱压不稳,出峰时间异常的现象
2.看到你所用的流动相,请问你的缓冲盐溶液用作流动相时的浓度是多少?如果浓度太高,那么在有机相:水相=65:35的情况下,缓冲盐很可能会析出,这也会造成柱压不稳,出峰时间异常

柱压不稳的原因通常有:
1.液相的泵出现问题,例如单向阀故障,混合阀故障
2.色谱柱损坏,填料塌陷
3.流动相不适当,例如缓冲盐析出
4.系统某处漏液
5.系统中存在气泡
3楼2012-02-08 21:37:15
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普弟

木虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 笨笨的宝贝 at 2012-02-08 18:29:53:
是新柱子吗,如果是新柱子的话,看看柱子出厂时装的溶剂是正向的还是反向的,是否需要置换,新的氨基柱处理起来很麻烦的,要是不是新的话,估计是填料已经不行了...

是新柱子啊,原来放的是正相,我已经用异丙醇过渡过了,异丙醇0.2ml/min走了10几小时了,然后再用纯乙腈走1个小时,然后再用65%乙腈-35%水走的。
4楼2012-02-08 21:38:29
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