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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 药物分析 » 氨基柱，65%乙腈-35%磷酸二氢钾缓冲盐，基线不稳以及出峰位置后移
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普弟

木虫 (正式写手)

[求助] 氨基柱，65%乙腈-35%磷酸二氢钾缓冲盐，基线不稳以及出峰位置后移

氨基柱，65%乙腈-35%磷酸二氢钾缓冲盐，走基线的时候，吸收一直往下降，然后柱压也不稳定，会不会是缓冲盐会析出来呢？

测样品的时候，标准图谱是17分钟出峰，但是我的峰竟然是到40分钟出来，而且基线也一直往下走，是什么原因呢？应该如何解决？

操作的过程是：90%乙腈-10%水过渡到65%乙腈-35%水 走1h，后面再走流动相。

柱压不稳应该有什么原因呢？

希望诸位老师和同学能够多多指点！谢谢！

[ Last edited by 普弟 on 2012-2-8 at 18:19 ]
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1楼 2012-02-08 18:13:26
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笨笨的宝贝

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
xiaoxiao270(金币+1): 3Q 2012-02-08 20:45:57
普弟(金币+5): ★★★很有帮助 谢谢！ 2012-02-08 21:39:00
是新柱子吗，如果是新柱子的话，看看柱子出厂时装的溶剂是正向的还是反向的，是否需要置换，新的氨基柱处理起来很麻烦的，要是不是新的话，估计是填料已经不行了...
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总有那么一个想要遗忘，却又念念不忘的人.....
2楼2012-02-08 18:29:53
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nrzhw

铁杆木虫 (著名写手)
★
xiaoxiao270(金币+1): 3Q 2012-02-09 11:40:10
1.正如楼上所说，柱子如果已经旧了，或者是平时的处理方法不得当，都会造成氨基柱的损坏，出现像柱压不稳，出峰时间异常的现象
2.看到你所用的流动相，请问你的缓冲盐溶液用作流动相时的浓度是多少？如果浓度太高，那么在有机相：水相=65:35的情况下，缓冲盐很可能会析出，这也会造成柱压不稳，出峰时间异常

柱压不稳的原因通常有：
1.液相的泵出现问题，例如单向阀故障，混合阀故障
2.色谱柱损坏，填料塌陷
3.流动相不适当，例如缓冲盐析出
4.系统某处漏液
5.系统中存在气泡
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3楼2012-02-08 21:37:15
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普弟

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 笨笨的宝贝 at 2012-02-08 18:29:53:
是新柱子吗，如果是新柱子的话，看看柱子出厂时装的溶剂是正向的还是反向的，是否需要置换，新的氨基柱处理起来很麻烦的，要是不是新的话，估计是填料已经不行了...

是新柱子啊，原来放的是正相，我已经用异丙醇过渡过了，异丙醇0.2ml/min走了10几小时了，然后再用纯乙腈走1个小时，然后再用65%乙腈-35%水走的。
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4楼2012-02-08 21:38:29
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普弟

木虫 (正式写手)
引用回帖:
楼: Originally posted by nrzhw at 2012-02-08 21:37:15:
1.正如楼上所说，柱子如果已经旧了，或者是平时的处理方法不得当，都会造成氨基柱的损坏，出现像柱压不稳，出峰时间异常的现象
2.看到你所用的流动相，请问你的缓冲盐溶液用作流动相时的浓度是多少？如果浓度太高 ...

柱子是刚买的，用异丙醇过渡过了，异丙醇0.2ml/min走了10几小时了，然后再用纯乙腈走1个小时，然后再用65%乙腈-35%水走的。缓冲盐的浓度是0.05mol/L。
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5楼2012-02-08 21:40:46
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nrzhw

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 普弟 at 2012-02-08 21:40:46:
柱子是刚买的，用异丙醇过渡过了，异丙醇0.2ml/min走了10几小时了，然后再用纯乙腈走1个小时，然后再用65%乙腈-35%水走的。缓冲盐的浓度是0.05mol/L。

检测器是什么的？DAD？检测波长是多少呢？
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6楼2012-02-08 22:41:14
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nrzhw

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 普弟 at 2012-02-08 21:40:46:
柱子是刚买的，用异丙醇过渡过了，异丙醇0.2ml/min走了10几小时了，然后再用纯乙腈走1个小时，然后再用65%乙腈-35%水走的。缓冲盐的浓度是0.05mol/L。

缓冲盐浓度有点高了，65%乙腈-35%磷酸二氢钾缓冲盐体系中，缓冲盐的总浓度换算出来是0.0175mol/L，而磷酸二氢钾在乙腈中的溶解度极低，因此原因肯能就是缓冲盐析出来了。
不妨做个预实验，可以试一下在一个烧杯中将乙腈与0.05mol/L的磷酸二氢钾缓冲盐以65%：35%混合，看一下是否有固体析出
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7楼2012-02-08 22:55:46
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痴夷子皮

版主 (文坛精英)

老痞

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
普弟(金币+5): ★★★很有帮助 2012-02-09 09:40:13
xiaoxiao270(金币+1): 3Q 2012-02-09 11:40:21
保留时间问题：
1、色谱柱柱效不行了
2、柱温、流动相pH等没调试好

柱压问题：
1、色谱柱损坏
2、漏液
3、管路有盐析出（单向阀密封圈等）
4、吸滤头有固体小颗粒吸附、流动相气泡
5、泵故障
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守候在风中的宁静。
8楼2012-02-09 08:28:38
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muyou

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by nrzhw at 2012-02-08 22:55:46:
缓冲盐浓度有点高了，65%乙腈-35%磷酸二氢钾缓冲盐体系中，缓冲盐的总浓度换算出来是0.0175mol/L，而磷酸二氢钾在乙腈中的溶解度极低，因此原因肯能就是缓冲盐析出来了。
不妨做个预实验，可以试一下在一个烧杯 ...

这个比例和浓度的流动相应该是没有问题的，年前我也用氨基柱流动相恰好也是这个，做了近一个月时间没有出现缓冲盐析出的问题，不过氨基柱特别是新氨基柱不好平衡是真的，我们新买的柱子第一次用也是很久（4-5小时）也不平衡，用过几次以后，流动相每天仍需要平衡1-2小时。建议楼主先换上同比例的乙腈水0.6ml/min平衡一个小时左右，然后重新配流动相，过滤，超声，也是先低流速平衡再调至1ml/min 多平衡一会儿试试。
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9楼2012-02-09 09:10:38
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muyou

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
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普弟(金币+10): ★★★很有帮助 2012-02-09 09:39:57
xiaoxiao270(金币+1): 3Q 2012-02-09 11:40:32
补充一点，我们也出现过基线下飘的情况，不过看漂移的程度，如果检测波长接近末端吸收基线是不容易完全走平的，在可接受范围内就哦了，这个也和检测器灯的情况有关的；还有柱压也是，小范围的波动也可以接受，波动的太厉害就要考虑脱气是否完全，泵内是否有气泡了。
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10楼2012-02-09 09:15:37
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