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反向PCR引物设计
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| 反向PCR引物怎样设计？需要注意些什么？ |
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yabxxh
木虫 (正式写手)
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【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜(金币+5, MolEPI+1): 解释很清楚，学习了！ 2012-01-13 18:14:41
longyh6411(金币+10): ★★★★★最佳答案 谢谢 2012-01-14 00:06:13
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西瓜(金币+5, MolEPI+1): 解释很清楚，学习了！ 2012-01-13 18:14:41
longyh6411(金币+10): ★★★★★最佳答案 谢谢 2012-01-14 00:06:13
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反向PCR的定义啥的我也就不说了，它主要的用途是扩增一段已知片段两端的序列，从而对其进行分析。 一般的做法是用已知片段内没有的内切酶进行相应DNA片段的单酶切，然后用T4连接酶连接起单切的这段DNA成环，可选步骤就是选一个该已知片段内的单酶切位点进行线性化，个人感觉这一步没有必要。 最后就是反向引物的设计了，常规PCR是对片段5'段设计正向引物，3'端设计反向引物。而反向PCR则是对该已知片段的5'端设计反向引物，3'端设计正向引物，以保证对已知片段两侧进行扩增。 引物的设计方法同常规PCR，如果你对常规PCR引物设计有疑问，请查看本论坛的相关帖子。 如还有疑问请跟帖说明。 祝好运。 |
2楼2012-01-13 15:44:43