应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 拟南芥突变体问题
81/1返回列表
查看: 2565  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

xpb2005

银虫 (小有名气)

[求助] 拟南芥突变体问题

我有一个A基因的突变体   鉴定为纯合突变体，   本来我设计了一对这个基因的引物做定量PCR用，  但我用这对引物去扩增这个基因的纯合突变体时（模板为cDNA，提RNA时加了DNAase I 处理），也扩增出了一条目的带，送去测序，结果是这段序列是A基因的一段序列。但我理解突变体是纯合的T-DNA插入突变，应该没有这个基因的mRNA存在的呀，怎么一做反转录后扩增可以扩增出这个基因，不理解？求高手指点？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-01-09 11:32:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sxxuan

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
可能是T-DNA插入突变对这个基因的转录没有影响，把整个插入当作异常蛋白给剪掉了。
我做的毕业论文也是这种情况，实在找不到原因了，师兄就给了我以上的解释。
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

xpb2005
你的日子如何，你的力量也必如何！
2楼2012-01-11 15:46:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xpb2005

银虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
楼: Originally posted by sxxuan at 2012-01-11 15:46:23:
可能是T-DNA插入突变对这个基因的转录没有影响，把整个插入当作异常蛋白给剪掉了。
我做的毕业论文也是这种情况，实在找不到原因了，师兄就给了我以上的解释。

如果转录不受影响的话，用此基因的全长引物扩增，以突变体的cDNA为模板，没有扩出带，这合理吗？
赞一下 回复此楼
3楼2012-01-12 19:27:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sxxuan

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

T-DNA插入位点如何？是在外显子还是内含子？如果是外显子的话，是靠近启动子的5‘端还是3’端？如果插入靠近3‘端，那么之前的转录可能是不受影响的，如果你设计的引物是根据不受影响的序列来设计的，那当然可以扩出来，但用全长引物，由于下游序列被突变了，所以不能扩增全长。
如果是上述的情况，你订购突变体的时候应该把所以对突变株都买回来，实在不行，也得换个定量PCR的引物，尽量以突变了的序列来设计。
不过我觉得这样其实是选择了对自己有利的数据，并不是这个突变体的所有真实情况的反映，也比较难解释突变体的表型之类的。
赞一下 回复此楼
你的日子如何，你的力量也必如何！
4楼2012-01-13 09:31:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

秋lover

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

楼主，虽然我不能回答你的问题，但是我想向你请教一下，突变数据是关于什么类型的数据啊？除了序列数据外，还有什么其它类型的数据吗？
有public能获取的吗？
赞一下 回复此楼
我要做一个勇敢的女子，要用自己的力量，立足于这个城市！！！
5楼2013-01-24 20:24:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xpb2005

银虫 (小有名气)
wizardfan: 请问你问题已解决没有？有的话，请对应助内容及时反馈是否有帮助（金币奖励） 2013-01-28 07:08:09
引用回帖:
5楼: Originally posted by 秋lover at 2013-01-24 20:24:40
楼主，虽然我不能回答你的问题，但是我想向你请教一下，突变数据是关于什么类型的数据啊？除了序列数据外，还有什么其它类型的数据吗？
有public能获取的吗？

关于你说的突变数据我不太明白你的意思，能说具体点吗？
赞一下 回复此楼
6楼2013-01-26 20:21:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

秋lover

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

关于有突变信息的数据，嗯，就是这个意思啦
赞一下 回复此楼
我要做一个勇敢的女子，要用自己的力量，立足于这个城市！！！
7楼2013-01-29 19:57:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wchuangqi

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
xpb2005: 金币+1, ★★★很有帮助 2013-06-19 22:34:24
首先你应该告诉大家，你是怎么样知道这个突变体就是纯合突变体的。如果你是通过PCR的方法的话，你必须知道T-DNA的插入位点，根据插入为点，设计相关的引物。如果T-DNA插入位点位于基因的3“端的时候，全长可能没有了，但是插入位点的5‘端有可能还在表达。当你的定量引物正好设计在插入位点5“端的时候，你当然就可以扩增出来了。这样的情况，我也遇到过。
赞一下 回复此楼
天道酬勤
8楼2013-06-19 13:43:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 xpb2005 的主题更新
81/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿华中科技大学071000，求调剂 +4 沿岸有贝壳6 2026-03-21 4/200 2026-03-22 07:21 by ilovexiaobin
[考研] 311求调剂 +13 冬十三 2026-03-15 14/700 2026-03-21 22:10 by peike
[考研] 一志愿西安交通大学材料工程专业 282分求调剂 +10 枫桥ZL 2026-03-18 12/600 2026-03-21 22:02 by peike
[考研] 化学工程321分求调剂 +18 大米饭！ 2026-03-15 22/1100 2026-03-21 20:20 by HH领袖
[考研] 333求调剂 +5 87639 2026-03-21 7/350 2026-03-21 19:31 by ColorlessPI
[考研] 求调剂 +5 十三加油 2026-03-21 5/250 2026-03-21 18:48 by 学员8dgXkO
[考研] 求调剂 +3 13341 2026-03-20 3/150 2026-03-21 18:28 by 学员8dgXkO
[考研] 278求调剂 +9 烟火先于春 2026-03-17 9/450 2026-03-21 17:47 by 学员8dgXkO
[考研] 336求调剂 +5 rmc8866 2026-03-21 5/250 2026-03-21 17:24 by 学员8dgXkO
[考研] 一志愿重庆大学085700资源与环境总分308求调剂 +7 墨墨漠 2026-03-20 7/350 2026-03-21 16:36 by barlinike
[考研] 机械专硕299求调剂至材料 +3 kkcoco25 2026-03-16 4/200 2026-03-21 03:52 by JourneyLucky
[考研] 初始318分求调剂（有工作经验） +3 1911236844 2026-03-17 3/150 2026-03-21 02:33 by JourneyLucky
[考研] 307求调剂 +10 冷笙123 2026-03-17 10/500 2026-03-21 01:54 by JourneyLucky
[考研] A区线材料学调剂 +5 周周无极 2026-03-20 5/250 2026-03-20 21:33 by laoshidan
[考研] 材料学硕297已过四六级求调剂推荐 +11 adaie 2026-03-19 11/550 2026-03-20 21:30 by laoshidan
[考研] 一志愿华中农业071010，总分320求调剂 +3 困困困困坤坤 2026-03-20 3/150 2026-03-20 20:38 by 学员8dgXkO
[考研] 生物学调剂招人！！！ +3 山海天岚 2026-03-17 4/200 2026-03-19 21:34 by 怎么释怀
[考研] 328求调剂，英语六级551，有科研经历 +4 生物工程调剂 2026-03-16 12/600 2026-03-19 11:10 by 生物工程调剂
[考研] 312求调剂 +8 陌宸希 2026-03-16 9/450 2026-03-18 12:39 by Linda Hu
[考研] 277调剂 +5 自由煎饼果子 2026-03-16 6/300 2026-03-17 19:26 by 李leezz
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭