应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 拟南芥突变体问题
51/1返回列表
查看: 2552  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

xpb2005

银虫 (小有名气)

[求助] 拟南芥突变体问题

我有一个A基因的突变体   鉴定为纯合突变体，   本来我设计了一对这个基因的引物做定量PCR用，  但我用这对引物去扩增这个基因的纯合突变体时（模板为cDNA，提RNA时加了DNAase I 处理），也扩增出了一条目的带，送去测序，结果是这段序列是A基因的一段序列。但我理解突变体是纯合的T-DNA插入突变，应该没有这个基因的mRNA存在的呀，怎么一做反转录后扩增可以扩增出这个基因，不理解？求高手指点？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-01-09 11:32:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wchuangqi

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
xpb2005: 金币+1, ★★★很有帮助 2013-06-19 22:34:24
首先你应该告诉大家，你是怎么样知道这个突变体就是纯合突变体的。如果你是通过PCR的方法的话，你必须知道T-DNA的插入位点，根据插入为点，设计相关的引物。如果T-DNA插入位点位于基因的3“端的时候，全长可能没有了，但是插入位点的5‘端有可能还在表达。当你的定量引物正好设计在插入位点5“端的时候，你当然就可以扩增出来了。这样的情况，我也遇到过。
赞一下 回复此楼
天道酬勤
8楼2013-06-19 13:43:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答

sxxuan

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
可能是T-DNA插入突变对这个基因的转录没有影响，把整个插入当作异常蛋白给剪掉了。
我做的毕业论文也是这种情况，实在找不到原因了，师兄就给了我以上的解释。
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

xpb2005
你的日子如何，你的力量也必如何！
2楼2012-01-11 15:46:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xpb2005

银虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
楼: Originally posted by sxxuan at 2012-01-11 15:46:23:
可能是T-DNA插入突变对这个基因的转录没有影响，把整个插入当作异常蛋白给剪掉了。
我做的毕业论文也是这种情况，实在找不到原因了，师兄就给了我以上的解释。

如果转录不受影响的话，用此基因的全长引物扩增，以突变体的cDNA为模板，没有扩出带，这合理吗？
赞一下 回复此楼
3楼2012-01-12 19:27:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sxxuan

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

T-DNA插入位点如何？是在外显子还是内含子？如果是外显子的话，是靠近启动子的5‘端还是3’端？如果插入靠近3‘端，那么之前的转录可能是不受影响的，如果你设计的引物是根据不受影响的序列来设计的，那当然可以扩出来，但用全长引物，由于下游序列被突变了，所以不能扩增全长。
如果是上述的情况，你订购突变体的时候应该把所以对突变株都买回来，实在不行，也得换个定量PCR的引物，尽量以突变了的序列来设计。
不过我觉得这样其实是选择了对自己有利的数据，并不是这个突变体的所有真实情况的反映，也比较难解释突变体的表型之类的。
赞一下 回复此楼
你的日子如何，你的力量也必如何！
4楼2012-01-13 09:31:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 欢迎采矿、地质、岩土、计算机、人工智能等专业的同学报考 +3 pin8023 2026-02-28 5/250 2026-03-02 00:24 by 花YOU重开日
[考研] 284求调剂 +8 天下熯 2026-02-28 8/400 2026-03-02 00:15 by 暮雨星晴
[基金申请] 本子写完了，给DS兄弟看了，得了92分 +3 Doma 2026-03-01 7/350 2026-03-02 00:00 by jnzsy
[考研] 材料学硕318求调剂 +5 February_Feb 2026-03-01 5/250 2026-03-01 23:31 by L135790
[考研] 化工299分求调剂 一志愿985落榜 +5 嘻嘻(*^ω^*) 2026-03-01 5/250 2026-03-01 19:47 by 无际的草原
[考研] 295求调剂 +7 19171856320 2026-02-28 7/350 2026-03-01 18:54 by 18137688336
[考研] 328求调剂 +3 aaadim 2026-03-01 5/250 2026-03-01 17:29 by njzyff
[考研] 化工专硕348，一志愿985求调剂 +5 弗格个 2026-02-28 8/400 2026-03-01 17:25 by sunny81
[考研] 311求调剂 +6 亭亭亭01 2026-03-01 6/300 2026-03-01 15:41 by 324616
[考研] 材料工程274求调剂 +3 Lilithan 2026-03-01 3/150 2026-03-01 14:58 by ms629
[考研] 295复试调剂 +3 简木ChuFront 2026-03-01 3/150 2026-03-01 14:27 by zzxw520th
[考研] 调剂 +3 简木ChuFront 2026-02-28 3/150 2026-03-01 11:46 by 王伟要上岸啊
[考研] 317一志愿华南理工电气工程求调剂 +6 Soliloquy_Q 2026-02-28 11/550 2026-03-01 11:14 by 歌liekkas
[考研] 寻找调剂 +4 LYidhsjabdj 2026-02-28 4/200 2026-03-01 10:56 by sunny81
[考研] 材料调剂 +4 爱擦汗的可乐冰 2026-02-28 4/200 2026-03-01 00:38 by 猫猫球alter
[基金申请] 面上模板改不了页边距吧？ +5 ieewxg 2026-02-25 6/300 2026-03-01 00:10 by addressing
[考研] 307求调剂 +4 73372112 2026-02-28 6/300 2026-03-01 00:04 by ll247
[考研] 264求调剂 +3 巴拉巴拉根556 2026-02-28 3/150 2026-02-28 21:31 by gaoxiaoniuma
[考研] 276求调剂 +3 路lyh123 2026-02-28 4/200 2026-02-28 19:45 by 路lyh123
[高分子] 求环氧树脂研发1名 +3 孙xc 2026-02-25 11/550 2026-02-28 16:57 by ichall
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭