24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
汕头大学海洋科学接受调剂
查看: 2609  |  回复: 7
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

xpb2005

银虫 (小有名气)

[求助] 拟南芥突变体问题

我有一个A基因的突变体   鉴定为纯合突变体,   本来我设计了一对这个基因的引物做定量PCR用,  但我用这对引物去扩增这个基因的纯合突变体时(模板为cDNA,提RNA时加了DNAase I 处理),也扩增出了一条目的带,送去测序,结果是这段序列是A基因的一段序列。但我理解突变体是纯合的T-DNA插入突变,应该没有这个基因的mRNA存在的呀,怎么一做反转录后扩增可以扩增出这个基因,不理解?求高手指点?
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

秋lover

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

楼主,虽然我不能回答你的问题,但是我想向你请教一下,突变数据是关于什么类型的数据啊?除了序列数据外,还有什么其它类型的数据吗?
有public能获取的吗?
我要做一个勇敢的女子,要用自己的力量,立足于这个城市!!!
5楼2013-01-24 20:24:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答

sxxuan

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
可能是T-DNA插入突变对这个基因的转录没有影响,把整个插入当作异常蛋白给剪掉了。
我做的毕业论文也是这种情况,实在找不到原因了,师兄就给了我以上的解释。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

你的日子如何,你的力量也必如何!
2楼2012-01-11 15:46:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xpb2005

银虫 (小有名气)

送鲜花一朵
引用回帖:
: Originally posted by sxxuan at 2012-01-11 15:46:23:
可能是T-DNA插入突变对这个基因的转录没有影响,把整个插入当作异常蛋白给剪掉了。
我做的毕业论文也是这种情况,实在找不到原因了,师兄就给了我以上的解释。

如果转录不受影响的话,用此基因的全长引物扩增,以突变体的cDNA为模板,没有扩出带,这合理吗?
3楼2012-01-12 19:27:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sxxuan

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

T-DNA插入位点如何?是在外显子还是内含子?如果是外显子的话,是靠近启动子的5‘端还是3’端?如果插入靠近3‘端,那么之前的转录可能是不受影响的,如果你设计的引物是根据不受影响的序列来设计的,那当然可以扩出来,但用全长引物,由于下游序列被突变了,所以不能扩增全长。
如果是上述的情况,你订购突变体的时候应该把所以对突变株都买回来,实在不行,也得换个定量PCR的引物,尽量以突变了的序列来设计。
不过我觉得这样其实是选择了对自己有利的数据,并不是这个突变体的所有真实情况的反映,也比较难解释突变体的表型之类的。
你的日子如何,你的力量也必如何!
4楼2012-01-13 09:31:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 求助调剂,跨调 +18 X十甫寸Y 2026-04-11 19/950 2026-04-14 19:26 by Art1977
[考研] 材料专业344求调剂 +17 hualkop 2026-04-10 22/1100 2026-04-14 16:21 by sxdj2
[考研] 药学305求调剂 +10 玛卡巴卡boom 2026-04-10 10/500 2026-04-14 15:55 by zs92450
[考研] 考研调剂 +13 长弓傲 2026-04-13 14/700 2026-04-14 14:44 by zs92450
[考研] 085404 298分求调剂 +11 呼啦呼啦呼呼呼 2026-04-10 12/600 2026-04-14 08:38 by wfj257
[考研] 一志愿哈工大 085600 277 12材科基求调剂 5+5 chenny174 2026-04-10 37/1850 2026-04-14 07:39 by Abskk
[考研] 22专硕求调剂 +8 haoyun上岸 2026-04-11 10/500 2026-04-13 22:15 by zhq0425
[考研] 一志愿双非085400电子信息344 求调剂,对材料和化学方向也感兴趣 +12 无情的小羊 2026-04-09 13/650 2026-04-13 14:17 by 张zhihao
[考研] 求调剂 +16 张番茄不炒蛋 2026-04-10 17/850 2026-04-12 13:58 by 熬夜成!
[考研] 280求调剂 +13 wzzz王 2026-04-09 13/650 2026-04-12 00:31 by 勇攀高峰0126
[考研] 085501机械专硕 302分 不挑专业求调剂 +7 汪某. 2026-04-09 7/350 2026-04-11 14:37 by luhong1990
[考研] 求调剂 +3 胃痉挛累了 2026-04-11 5/250 2026-04-11 14:13 by luhong1990
[考研] 广东省 085601 329分求调剂 +14 Eddieddd 2026-04-10 14/700 2026-04-11 09:58 by bljnqdcc
[考研] 化学工程与技术324调剂 +23 孙常华 2026-04-09 25/1250 2026-04-11 00:07 by 骑牛渡寒江
[考研] 调剂 +19 小张ZA 2026-04-10 20/1000 2026-04-10 22:08 by 猪会飞
[考研] 083200 305分 求二轮调剂 不接受跨专业 +9 Claireyyyy 2026-04-09 10/500 2026-04-10 21:21 by Claireyyyy
[考研] 314求调剂 +18 xhhdjdjsjks 2026-04-09 19/950 2026-04-10 18:53 by HPUCZ
[考研] 070300化学 求调剂 +13 73372112 2026-04-08 13/650 2026-04-09 20:22 by maddjdld
[考研] 求机械专硕297第二批调剂 +5 拾柒12。 2026-04-08 5/250 2026-04-09 16:43 by 允当适度
[考研] 求调剂,现在还能填的 +3 上岸小莹加油 2026-04-08 3/150 2026-04-08 14:30 by zhq0425
信息提示
请填处理意见