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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 凝胶层析图谱问题
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BIO-che

新虫 (小有名气)

[求助] 凝胶层析图谱问题

我是做蛋白质纯化的，第一次装柱就跑凝胶，结果有3个气泡，没有发现，跑了一次后，出了2个峰。后来重新装柱，结果发现少了一个峰，原来那个小峰的地方变成一个很小的突起。但是两次上样的量是一样的。
我两次出峰的时间都比较短，大约是走了0.5个柱子体积就出第一个峰，第二个峰大约是0.7-0.8个柱体积就出峰了。
而我的蛋白质条带大约在60KD以下的为主，用的是进口的S-200
各位大侠觉得我是哪里出问题了？
见2，3楼

[ Last edited by 1949stone on 2011-12-18 at 22:04 ]
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1楼 2011-12-16 21:18:28
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
上图
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2楼2011-12-17 01:31:33
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
★ ★
西瓜(金币+2): Good! 2011-12-18 18:18:31
我已经看过图了，60KD的蛋白质属于S200的分离范围，肯定会在一个柱床体积内出来的。既然蛋白质是多个，那么无论是一个还是2个峰都是没用的，都得不到纯的单条带组分的，换别的分离方法吧。
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5楼2011-12-18 14:32:22
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
★
西瓜(金币+1): 高人！ 2011-12-18 18:18:42
而且这条A280基线跳动得太剧烈了，机器有问题，可能是光源。
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6楼2011-12-18 14:33:49
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
空气是会产生紫外吸收的，会有一点气泡随着流动相出来引起A280波动。

淀粉酶是酶，上样前可能有些离子促进酶活力，除去之后自然就下降了。之前的比活力可能是假象，现在才是真相。
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BIO-che
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9楼2011-12-19 15:01:19
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
分子筛会脱盐，使蛋白质样品里原本含有的盐与蛋白质分开，不知道会不会吸附离子。
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BIO-che
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11楼2011-12-20 06:50:46
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冼亮淀粉酶

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生物大分子降解酶

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
wanhscn(金币+5, MolEPI+1): 精彩完整应助！理应授予EPI！ 2011-12-21 10:10:38
10和60都不能分开，那你只能换别的凝胶过滤柱了，这稍微夸张了点，多少都会有点开的。那么多层析柱为什么纠结于这个？
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13楼2011-12-21 00:10:16
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
那你增加一步，跑活性胶，切胶，纯度会有提高的。
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15楼2011-12-21 17:22:01
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
西瓜(金币+5, MolEPI+1): Good!有图有真相，呵呵~辛苦！ 2011-12-21 17:50:35
引用回帖:
15楼: Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2011-12-21 17:22:01:
那你增加一步，跑活性胶，切胶，纯度会有提高的。

这张电泳图是非变性胶，第一个泳道是电泳纯的酶，后面的所有泳道都是层析后的收集液，你看看我一下子能去掉多少条带？起码有15条！
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BIO-che BIO-che
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16楼2011-12-21 17:43:25
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=3770565&authorid=856414
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19楼2011-12-24 22:56:45
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
把实验步骤和所用材料得到结果放上来
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21楼2011-12-24 23:44:15
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