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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 凝胶层析图谱问题
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
分子筛会脱盐，使蛋白质样品里原本含有的盐与蛋白质分开，不知道会不会吸附离子。
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BIO-che
流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
11楼2011-12-20 06:50:46
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新虫 (小有名气)
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楼: Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2011-12-20 06:50:46:
分子筛会脱盐，使蛋白质样品里原本含有的盐与蛋白质分开，不知道会不会吸附离子。

我的分子筛的柱子只有45厘米高，会不会这个长度造成了我的分子筛效果不好。我跑电泳时，离子胶处理后的条带与分子筛处理后的结果没有差别。我的目标大约在60 而有大量的杂蛋白在10-30左右。这怎么会分不开呢？难道是我的分部收集管污染了？
我的管子是用水煮沸10分钟，用自来水洗后，再用蒸馏水洗净后烘干。管子上的塞子只是洗净没有煮沸灭菌 这样会影响吗？电泳的枪头全是灭过菌的？
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12楼2011-12-20 23:42:01
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
wanhscn(金币+5, MolEPI+1): 精彩完整应助！理应授予EPI！ 2011-12-21 10:10:38
10和60都不能分开，那你只能换别的凝胶过滤柱了，这稍微夸张了点，多少都会有点开的。那么多层析柱为什么纠结于这个？
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13楼2011-12-21 00:10:16
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新虫 (小有名气)
引用回帖:
楼: Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2011-12-21 00:10:16:
10和60都不能分开，那你只能换别的凝胶过滤柱了，这稍微夸张了点，多少都会有点开的。那么多层析柱为什么纠结于这个？

我们实验室的条件有限，估计只能在要S－200   G-75中下文章，我和老板谈了一下，疏水柱可能有点困难，估计目前只能采用加长柱身的方法，加入大量的S-200. 我想S-200不至于连60与10都分不开 ，这也太奇怪了 。会不会是我装柱或者哪里出问题？
我的离子胶分离的最后结果与分子筛是一样，（电 泳）也就是两者没有区别，不太可能啊？
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14楼2011-12-21 14:52:09
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
那你增加一步，跑活性胶，切胶，纯度会有提高的。
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15楼2011-12-21 17:22:01
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
西瓜(金币+5, MolEPI+1): Good!有图有真相，呵呵~辛苦！ 2011-12-21 17:50:35
引用回帖:
15楼: Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2011-12-21 17:22:01:
那你增加一步，跑活性胶，切胶，纯度会有提高的。

这张电泳图是非变性胶，第一个泳道是电泳纯的酶，后面的所有泳道都是层析后的收集液，你看看我一下子能去掉多少条带？起码有15条！
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16楼2011-12-21 17:43:25
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新虫 (小有名气)
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楼: Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2011-12-21 17:43:25:
这张电泳图是非变性胶，第一个泳道是电泳纯的酶，后面的所有泳道都是层析后的收集液，你看看我一下子能去掉多少条带？起码有15条！

切胶是用什么办法回收？是专门的试剂盒吗？
我的导师也想过类似的方法，只是苦于找不到温和的回收方法，因为如果像DNA那样回收的话，要将胶于90度左右融化，再离心取上清液，跑PCR就可以跑出目标DNA，而酶在这种 方法下可能做不到啊？
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17楼2011-12-22 00:21:34
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楼: Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2011-12-21 17:43:25:
这张电泳图是非变性胶，第一个泳道是电泳纯的酶，后面的所有泳道都是层析后的收集液，你看看我一下子能去掉多少条带？起码有15条！

问一下你是对割出来的胶是怎么处理的？我一直处理不了 谢谢
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18楼2011-12-24 21:49:49
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冼亮淀粉酶

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生物大分子降解酶
http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=3770565&authorid=856414
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19楼2011-12-24 22:56:45
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新虫 (小有名气)
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楼: Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2011-12-24 22:56:45:
http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=3770565&authorid=856414
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而且如果把凝胶碾碎之后浸泡也是能得到蛋白质的，我最多能得到30%，一般是20%（保留酶活力）， 是怎么碾碎的话，为什么我会提不出来呢？是不是不可以放底物在胶里，不可以用碘染后，再提取啊
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20楼2011-12-24 23:31:27
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