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BIO-che

新虫 (小有名气)

[求助] 凝胶层析图谱问题

我是做蛋白质纯化的,第一次装柱就跑凝胶,结果有3个气泡,没有发现,跑了一次后,出了2个峰。后来重新装柱,结果发现少了一个峰,原来那个小峰的地方变成一个很小的突起。但是两次上样的量是一样的。
我两次出峰的时间都比较短,大约是走了0.5个柱子体积就出第一个峰,第二个峰大约是0.7-0.8个柱体积就出峰了。
而我的蛋白质条带大约在60KD以下的为主,用的是进口的S-200
各位大侠觉得我是哪里出问题了?
见2,3楼

[ Last edited by 1949stone on 2011-12-18 at 22:04 ]
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BIO-che

新虫 (小有名气)

送鲜花一朵
引用回帖:
楼: Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2011-12-21 17:43:25:
这张电泳图是非变性胶,第一个泳道是电泳纯的酶,后面的所有泳道都是层析后的收集液,你看看我一下子能去掉多少条带?起码有15条!

切胶是用什么办法回收?是专门的试剂盒吗?
我的导师也想过类似的方法,只是苦于找不到温和的回收方法,因为如果像DNA那样回收的话,要将胶于90度左右融化,再离心取上清液,跑PCR就可以跑出目标DNA,而酶在这种 方法下可能做不到啊?
17楼2011-12-22 00:21:34
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BIO-che

新虫 (小有名气)

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  • 附件 1 : BIO-che3张纯化图.rar
  • 2011-12-17 19:54:38, 180.62 K
3楼2011-12-17 19:55:22
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BIO-che

新虫 (小有名气)

3张图的时间顺序就是这样。第1张是有气泡的柱子跑的。第3张加样量加大了0.5倍,好像大峰的右边是不是还有一个小峰,没有分开?丢掉的小峰就是第1张中的第1个峰
4楼2011-12-17 19:58:11
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

★ ★
西瓜(金币+2): Good! 2011-12-18 18:18:31
我已经看过图了,60KD的蛋白质属于S200的分离范围,肯定会在一个柱床体积内出来的。既然蛋白质是多个,那么无论是一个还是2个峰都是没用的,都得不到纯的单条带组分的,换别的分离方法吧。
流星来时我许了个愿,愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具,久不看论坛一来就提问者,宁弃EPI和VIP也不回帖。
5楼2011-12-18 14:32:22
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