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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 凝胶层析图谱问题
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BIO-che

新虫 (小有名气)

[求助] 凝胶层析图谱问题

我是做蛋白质纯化的，第一次装柱就跑凝胶，结果有3个气泡，没有发现，跑了一次后，出了2个峰。后来重新装柱，结果发现少了一个峰，原来那个小峰的地方变成一个很小的突起。但是两次上样的量是一样的。
我两次出峰的时间都比较短，大约是走了0.5个柱子体积就出第一个峰，第二个峰大约是0.7-0.8个柱体积就出峰了。
而我的蛋白质条带大约在60KD以下的为主，用的是进口的S-200
各位大侠觉得我是哪里出问题了？
见2，3楼

[ Last edited by 1949stone on 2011-12-18 at 22:04 ]
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1楼 2011-12-16 21:18:28
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BIO-che

新虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
楼: Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2011-12-20 06:50:46:
分子筛会脱盐，使蛋白质样品里原本含有的盐与蛋白质分开，不知道会不会吸附离子。

我的分子筛的柱子只有45厘米高，会不会这个长度造成了我的分子筛效果不好。我跑电泳时，离子胶处理后的条带与分子筛处理后的结果没有差别。我的目标大约在60 而有大量的杂蛋白在10-30左右。这怎么会分不开呢？难道是我的分部收集管污染了？
我的管子是用水煮沸10分钟，用自来水洗后，再用蒸馏水洗净后烘干。管子上的塞子只是洗净没有煮沸灭菌 这样会影响吗？电泳的枪头全是灭过菌的？
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12楼2011-12-20 23:42:01
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BIO-che

新虫 (小有名气)
http://good.gd/1841786.htm
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  • 附件 1 : BIO-che3张纯化图.rar
    • 2011-12-17 19:54:38, 180.62 K
3楼2011-12-17 19:55:22
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BIO-che

新虫 (小有名气)
3张图的时间顺序就是这样。第1张是有气泡的柱子跑的。第3张加样量加大了0.5倍，好像大峰的右边是不是还有一个小峰，没有分开？丢掉的小峰就是第1张中的第1个峰
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4楼2011-12-17 19:58:11
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
★ ★
西瓜(金币+2): Good! 2011-12-18 18:18:31
我已经看过图了，60KD的蛋白质属于S200的分离范围，肯定会在一个柱床体积内出来的。既然蛋白质是多个，那么无论是一个还是2个峰都是没用的，都得不到纯的单条带组分的，换别的分离方法吧。
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
5楼2011-12-18 14:32:22
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