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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 凝胶层析图谱问题
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BIO-che

新虫 (小有名气)

[求助] 凝胶层析图谱问题

我是做蛋白质纯化的，第一次装柱就跑凝胶，结果有3个气泡，没有发现，跑了一次后，出了2个峰。后来重新装柱，结果发现少了一个峰，原来那个小峰的地方变成一个很小的突起。但是两次上样的量是一样的。
我两次出峰的时间都比较短，大约是走了0.5个柱子体积就出第一个峰，第二个峰大约是0.7-0.8个柱体积就出峰了。
而我的蛋白质条带大约在60KD以下的为主，用的是进口的S-200
各位大侠觉得我是哪里出问题了？
见2，3楼

[ Last edited by 1949stone on 2011-12-18 at 22:04 ]
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1楼 2011-12-16 21:18:28
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
空气是会产生紫外吸收的，会有一点气泡随着流动相出来引起A280波动。

淀粉酶是酶，上样前可能有些离子促进酶活力，除去之后自然就下降了。之前的比活力可能是假象，现在才是真相。
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BIO-che
流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
9楼2011-12-19 15:01:19
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BIO-che

新虫 (小有名气)
http://good.gd/1841786.htm
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  • 附件 1 : BIO-che3张纯化图.rar
    • 2011-12-17 19:54:38, 180.62 K
3楼2011-12-17 19:55:22
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BIO-che

新虫 (小有名气)
3张图的时间顺序就是这样。第1张是有气泡的柱子跑的。第3张加样量加大了0.5倍，好像大峰的右边是不是还有一个小峰，没有分开？丢掉的小峰就是第1张中的第1个峰
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4楼2011-12-17 19:58:11
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
★ ★
西瓜(金币+2): Good! 2011-12-18 18:18:31
我已经看过图了，60KD的蛋白质属于S200的分离范围，肯定会在一个柱床体积内出来的。既然蛋白质是多个，那么无论是一个还是2个峰都是没用的，都得不到纯的单条带组分的，换别的分离方法吧。
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
5楼2011-12-18 14:32:22
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