【答案】应助回帖

楼: Originally posted by 月月大可 at 2011-12-12 19:56:58:
我一般使用Nde I酶切位点，这是能发挥his tag 功能又尽可能减少外援氨基酸的最优做法。但蛋白亲和层析阶段我还可以使用 凝血酶 将N段的his tag 切除。这样相当于同时进行了亲和层析纯化后再使用蛋白酶进行特异选择 ...

楼: Originally posted by 月月大可 at 2011-12-12 21:33:29:
从nco i 起始就需要凑阅读框了

楼: Originally posted by xiaoshidemei at 2011-12-13 08:56:35:
不会影响蛋白活性，我做过，有的蛋白会稍微影响，就看你那蛋白结构复杂不，分子量大不

27楼: Originally posted by 遇见8521 at 2011-12-13 12:37:12:
一般His Tag 对蛋白活性影响不大 可考虑用NcolI和EcoRI酶切

3楼: Originally posted by lxj341401 at 2011-12-12 16:17:44
先做了看看活性，没有活性的话重新构建，换酶切位点NcoI（也会多两个氨基酸），或者换载体。