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rhguo

铜虫 (小有名气)

[求助] 蛋白质透析后沉淀如何复溶

E coli表达的蛋白质经纯化纯度达95%，采用梯度递减的透析方法透析，到最后一个液体（PBS ，蛋白质等电点PH）的时候却发现透析袋里面都是些白色的小块沉淀。，现在我想请问大家，我能用什么方法，让这些蛋白质再溶解？可不可以用简单的稀释方法呢？如果加了其它试剂我怕会影响我后面的试验，因为我的蛋白是要用来做试剂盒的标准品的。
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rhguo

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1楼 2011-12-11 10:40:51
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nmzld

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

这样的实验我没有做过，我建议你改变pH值，如果沉淀之前是逐渐减小pH值，那你现在为了使蛋白质溶解就采用逐渐增加pH值的方法，使蛋白质分子重新带电，再次溶解。
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2楼2011-12-11 19:26:12
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pgwyl

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
3楼2011-12-11 19:47:28
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rhguo

铜虫 (小有名气)
送鲜花一朵
我之前是采用逐渐增加的PH,从洗脱液的4.5，递增到后面的8，发现有沉淀的再调回等电点PH，还是有沉淀啊，主要是起溶解作用的尿素透析掉了，不知道要加什么促溶剂
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4楼2011-12-12 08:39:30
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bintaoD

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

该成分可能只能在酸性条件才能稳定存在，PH=8时或许已经变性了
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源源不断
5楼2011-12-12 21:50:03
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