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rhguo

铜虫 (小有名气)

[求助] 蛋白质透析后沉淀如何复溶

E coli表达的蛋白质经纯化纯度达95%,采用梯度递减的透析方法透析,到最后一个液体(PBS ,蛋白质等电点PH)的时候却发现透析袋里面都是些白色的小块沉淀。,现在我想请问大家,我能用什么方法,让这些蛋白质再溶解?可不可以用简单的稀释方法呢?如果加了其它试剂我怕会影响我后面的试验,因为我的蛋白是要用来做试剂盒的标准品的。

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nmzld

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

这样的实验我没有做过,我建议你改变pH值,如果沉淀之前是逐渐减小pH值,那你现在为了使蛋白质溶解就采用逐渐增加pH值的方法,使蛋白质分子重新带电,再次溶解。
2楼2011-12-11 19:26:12
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pgwyl

禁虫 (小有名气)

本帖内容被屏蔽

3楼2011-12-11 19:47:28
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rhguo

铜虫 (小有名气)

送鲜花一朵
我之前是采用逐渐增加的PH,从洗脱液的4.5,递增到后面的8,发现有沉淀的再调回等电点PH,还是有沉淀啊,主要是起溶解作用的尿素透析掉了,不知道要加什么促溶剂
4楼2011-12-12 08:39:30
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bintaoD

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

该成分可能只能在酸性条件才能稳定存在,PH=8时或许已经变性了
源源不断
5楼2011-12-12 21:50:03
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