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木左左银虫 (正式写手)
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[求助]
高GC含量基因片段PCR问题
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大家好，我现在克隆一组目的片段，以cDNA为模板，片段大小2kbp左右，GC含量均超过60%，实验做了2个多月，没有进展，很是苦恼 主要用的大连宝生物的la酶和GCbuffer 我在网上搜过，高GC含量片段国内肯定很多学校有成熟的方法，国外更多的是专利，我希望大家能帮帮我，他别是一下问题： 1.关于引物设计的问题，需要特别注意什么？ 2.反应体系的问题，个组分的量，哪种酶效果好，额外的试剂？ 3.程序问题，Tm值较高，是不是退火温度也可以比较高？变形温度用不用很高？ 4.比较高的GC含量到底对基因的结构有什么影响？ 如果哪位师兄师姐有这方面的经验或者是专利方面的信息业希望可以告诉我，小弟不胜感激，谢谢大家！ |
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