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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 蛋白质纯化凝胶层析
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BIO-che

新虫 (小有名气)

[求助] 蛋白质纯化凝胶层析

我准备用凝胶层析的方法来纯化目标蛋白，计划要用S-200，不知上样时，要一次至少要上多少毫克的蛋白质溶液才行？多少毫升？每毫升多少毫克？
同时想问一下，S-200装柱时一定要一次性全装上才行吗？我的实验室是没有泵的，只能手工装？
蛋白质溶液是不是一定要垂直加入胶上？那么缓冲液也要直加入胶上吗？还有加入液体的上管道最远能够离胶面多远？如果胶上表面 积水过多，会不会影响结果？
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1楼 2011-12-07 23:31:43
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acehanhan

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
西瓜(金币+1): Good! 2011-12-13 18:56:42
因为层析柱要垂直，而连接层析柱的柱头应该是密封的，这样才能保持系统中的恒压和恒流。
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9楼2011-12-13 15:36:21
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lihuan0525

金虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
西瓜(金币+1): Good！ 2011-12-08 19:04:38
你可以买预装柱啊，没有泵能装好吗，装不好的话做了也没有效果，一般凝胶过滤的话上样量为柱体积的5%，脱盐的话可以多上的。
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2楼2011-12-08 08:55:47
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lpw106

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
西瓜(金币+5, MolEPI+1): Good！欢迎常来哦~ 2011-12-08 19:05:10
BIO-che(金币+2): 不错 2011-12-16 21:12:17
分子筛吗？
1、分子筛的上样对蛋白量和浓度没有特别要求，一般关注上样体积（不超过5%），如果你想峰高点，可把蛋白总量提高点；
2、为了避免重力扩散，所有操作一般是up方向；
3、分子筛对柱效要求较高，如果你没有纯化系统来装，可能装出来的柱效也不好，分离效果也不好，建议先用预装柱试。
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3楼2011-12-08 09:32:14
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cai198559

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
西瓜(金币+3): Good！ 2011-12-08 19:05:32
自己装的柱，分辨率较预装柱差点，上样体积一般是柱体积的2-5%较合适，蛋白总量会影响分辨率的，总量太高，有可能会使你的蛋白纯化效果偏差，这取决于你要纯化前蛋白的纯度。
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4楼2011-12-08 14:41:08
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