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蛋白质纯化凝胶层析
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我准备用凝胶层析的方法来纯化目标蛋白，计划要用S-200，不知上样时，要一次至少要上多少毫克的蛋白质溶液才行？多少毫升？每毫升多少毫克？ 同时想问一下，S-200装柱时一定要一次性全装上才行吗？我的实验室是没有泵的，只能手工装？ 蛋白质溶液是不是一定要垂直加入胶上？那么缓冲液也要直加入胶上吗？还有加入液体的上管道最远能够离胶面多远？如果胶上表面 积水过多，会不会影响结果？ |
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acehanhan
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【答案】应助回帖
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感谢参与，应助指数 +1
西瓜(金币+5): Good!说得很细致了！ 2011-12-11 17:52:44
感谢参与，应助指数 +1
西瓜(金币+5): Good!说得很细致了！ 2011-12-11 17:52:44
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在一定的上样量中，蛋白质的浓度高点好，没有具体要求，因为分子筛有对样品会有稀释作用。样品浓度低的话层析后更低。 上样前要让缓冲液刚刚流入凝胶，表面保留一点点（不能让胶进入空气），关闭开关； 将样品液用滴灌缓缓加入柱中，打开开关，让样品溶液也是刚刚进入柱中（柱表面也是保留一点点），关闭开关； 再缓缓加入洗脱液覆盖凝胶表面，然后接上洗脱液进行洗脱。 整个操作过程液体表面不能低于凝胶柱的表面。柱头及整个柱子在层析过程中均为垂直。 |
7楼2011-12-11 08:35:04
lihuan0525
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2楼2011-12-08 08:55:47
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