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guozejing

银虫 (小有名气)

[交流] 蛋白二聚体消除 已有1人参与

现在在做一个TNF家族的重组蛋白,分子量19KD,在纯化过程中二聚体化的程度比较高,并且难以分离,求助大家在消除蛋白二聚体或在纯化中除去二聚体的方法。谢谢。
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疯狂
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douzihu

至尊木虫 (正式写手)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
从头开始(金币+2): 感谢参与 2011-12-04 22:31:11
纯化中去除二聚体的一般方法就是用凝胶色谱层析,优点是简洁有效填料便宜,缺点是上样量有限制。另外要是条件允许的话可以试试离子交换层析柱,不过实验条件摸索需要一定时间,我用过GE的capto adhere填料,这种填料属于复合型离子交换填料,用来推荐纯化分离单抗和二聚体的,纯化过程中单体在flow through流穿,二聚体、宿主蛋白、DNA、病毒等挂柱,最终达到分离目的。
2楼2011-12-04 12:05:11
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guozejing

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by douzihu at 2011-12-04 12:05:11:
纯化中去除二聚体的一般方法就是用凝胶色谱层析,优点是简洁有效填料便宜,缺点是上样量有限制。另外要是条件允许的话可以试试离子交换层析柱,不过实验条件摸索需要一定时间,我用过GE的capto adhere填料,这种填 ...

谢谢。现在是在用GE的阴离子交换Q柱分离。不过我这个蛋白二聚体的形成可能是外界因素,如缓冲体系:pH、温度、离子强度或添加助溶剂等,有没有同仁做这一方面的,在二聚体的减少这一方面赐教一下。
疯狂
3楼2011-12-04 15:49:52
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