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HarveyWang

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[交流] OD值测量的大肠杆菌菌体密度同CFU菌落数并不存在等同关系。已有3人参与

【你好，我最近遇到了大肠杆菌O157和OD值对应关系的问题。急问，谢谢！
之前我做的在OD值0.6时菌落数约为10的八次幂，重复再现性也蛮好的。就最近几次在OD值为0.6时菌落数下降了5-10倍，请问这是什么情况呢？还被老师臭骂了一通、
谢谢！！！】

CFU计数的前提是活细胞是单细胞。但是，大肠杆菌在各个生长阶段，基本生都不是单细胞的。双细胞和菌体连丝占绝大多数。你的菌体生长的很好，这时，主要以菌体连丝存在，在相同OD值时，CFU计数是可能下降5-10倍的。即使采用同一种培养基。你的这个现象出现是可能的。并不是你的实验做的不好。

建议：你最好是用指数生长后期的菌体细胞计数，这是细胞绝大部分都还没死亡，但是细胞分散程度高。

相关论文链接：http://www.sciencedirect.com/sci ... i/S0167701210003842
【Fig. 2 shows the micrographs of methylene blue-stained and formazan-covered E. coli cells grown for 3 h (at the early exponential phase) and 8 h (on entry into the stationary phase). The results clearly show that in the early exponential growth phase, E. coli cells formed long beaded strings, usually in 4–8 cell lengths (Fig. 2C); while on entry into the stationary phase, E. coli cells tended to disperse, partly into two-cell complexes (Fig. 2B and D). A certain number of viable E. coli cells can form various colony sizes due to different levels of cell aggregation during growth. In the plate count method, the force of mixing during cell dilution does not fully break bacterial links, and the same number of viable bacteria in the early exponential phase would grow fewer colonies on the LBG plates than those at the end of exponential growth.】

1. OD值测量的大肠杆菌菌体密度同CFU菌落数并不存在等同关系。
即使采用同一种培养基。你的这个现象出现是可能的。并不是你的实验做的不好。

你知道，菌体长到OD600= 0.6，同你用更浓的菌液稀释到OD600=0.6. 这两者涂平板所得的CFU值没有任何等同性。

因为，一般情况下，菌体处在OD600=0.6，处于指数生长期，活力很高，增殖很快，形成“念珠状菌体连丝”，一般为4-10个菌体连在一起。这时，你涂平板后长出的CFU值要远远小于真正的菌体浓度，可能是真正的菌体浓度的1/4 到1/10.

2. 相同的菌体浓度，不同的生长时期，涂平板所得的CFU数目不同。
指数生长期，菌体连在一起，CFU所得的数目远远小于真实的菌体浓度。
指数生长后期，菌体都没有死亡，但是，由于培养基的摇动，菌体分散开来，这时，CFU所得的数目大约是真实菌体浓度的0.3-0.8. 因为这些菌体里面，有20-70%的菌体是二连体，也有单细胞的。

在平台期后期，菌体开始死亡，单细胞比例还会增加，这时，CFU数目还是没法等同于菌体浓度。

[ Last edited by HarveyWang on 2011-12-1 at 11:35 ]

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