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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 聚乙烯亚胺沉淀去除核酸
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yanying198

新虫 (小有名气)

[求助] 聚乙烯亚胺沉淀去除核酸

我有一蛋白结合核酸，试过DNAase,RNAase,也试过高低盐交替冲洗，还试过Hitrap(肝素柱子)效果都不好，现在想用PEI（聚乙烯亚胺）沉淀法，我想问的是我需要买多大聚合度的PEI，分子量大约多少？我的蛋白也是酸性的，是不是一起沉淀下来了？
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1楼 2011-11-30 15:19:50
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匆匆3016

新虫 (初入文坛)
一般情况下沉淀核酸PEI的使用浓度是多少？
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go ahead show your wild side
4楼2012-12-15 10:57:37
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fxgowen

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

yanying198(金币+5): 2011-12-04 17:42:09
在细胞破碎的上清中加入，polyethylenimine聚乙烯亚胺（25 kD，Sigma 公司），离心，因为蛋白和核酸是一同被PEI沉淀下来的，然后再用高盐洗脱蛋白质，而DNA和PEI结合很紧密，所以还是在沉淀里面。这样一来，好多垃圾蛋白和核酸都被去掉了。到了这一步，还有一个问题。就是洗脱下来的蛋白里面还有PEI, 如果现在就用透析的办法降低盐浓度，PEI和蛋白会重新形成沉淀。所以下一步就是用硫酸胺沉淀的办法把蛋白和PEI分开。用低盐buffer重溶沉淀的蛋白,再过亲合柱就行了。
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2楼2011-12-03 16:30:48
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yanying198

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by fxgowen at 2011-12-03 16:30:48:
在细胞破碎的上清中加入，polyethylenimine聚乙烯亚胺（25 kD，Sigma 公司），离心，因为蛋白和核酸是一同被PEI沉淀下来的，然后再用高盐洗脱蛋白质，而DNA和PEI结合很紧密，所以还是在沉淀里面。这样一来，好多垃 ...

多大聚合度的PEI，分子量大约多少？
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3楼2011-12-04 20:38:42
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0700810107

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by fxgowen at 2011-12-03 16:30:48
在细胞破碎的上清中加入，polyethylenimine聚乙烯亚胺（25 kD，Sigma 公司），离心，因为蛋白和核酸是一同被PEI沉淀下来的，然后再用高盐洗脱蛋白质，而DNA和PEI结合很紧密，所以还是在沉淀里面。这样一来，好多垃圾 ...

我有一个多糖样品，想去除其中的核酸和蛋白，是不是可以用PEI沉淀一同去除呢？一般要加入多少浓度的PEI呢？
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5楼2013-04-03 11:02:46
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