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yanying198

新虫 (小有名气)

[求助] 聚乙烯亚胺沉淀去除核酸

我有一蛋白结合核酸,试过DNAase,RNAase,也试过高低盐交替冲洗,还试过Hitrap(肝素柱子)效果都不好,现在想用PEI(聚乙烯亚胺)沉淀法,我想问的是我需要买多大聚合度的PEI,分子量大约多少?我的蛋白也是酸性的,是不是一起沉淀下来了?
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0700810107

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by fxgowen at 2011-12-03 16:30:48
在细胞破碎的上清中加入,polyethylenimine聚乙烯亚胺(25 kD,Sigma 公司),离心,因为蛋白和核酸是一同被PEI沉淀下来的,然后再用高盐洗脱蛋白质,而DNA和PEI结合很紧密,所以还是在沉淀里面。这样一来,好多垃圾 ...

我有一个多糖样品,想去除其中的核酸和蛋白,是不是可以用PEI沉淀一同去除呢?一般要加入多少浓度的PEI呢?
5楼2013-04-03 11:02:46
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fxgowen

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

yanying198(金币+5): 2011-12-04 17:42:09
在细胞破碎的上清中加入,polyethylenimine聚乙烯亚胺(25 kD,Sigma 公司),离心,因为蛋白和核酸是一同被PEI沉淀下来的,然后再用高盐洗脱蛋白质,而DNA和PEI结合很紧密,所以还是在沉淀里面。这样一来,好多垃圾蛋白和核酸都被去掉了。到了这一步,还有一个问题。就是洗脱下来的蛋白里面还有PEI, 如果现在就用透析的办法降低盐浓度,PEI和蛋白会重新形成沉淀。所以下一步就是用硫酸胺沉淀的办法把蛋白和PEI分开。用低盐buffer重溶沉淀的蛋白,再过亲合柱就行了。
2楼2011-12-03 16:30:48
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yanying198

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by fxgowen at 2011-12-03 16:30:48:
在细胞破碎的上清中加入,polyethylenimine聚乙烯亚胺(25 kD,Sigma 公司),离心,因为蛋白和核酸是一同被PEI沉淀下来的,然后再用高盐洗脱蛋白质,而DNA和PEI结合很紧密,所以还是在沉淀里面。这样一来,好多垃 ...

多大聚合度的PEI,分子量大约多少?
3楼2011-12-04 20:38:42
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匆匆3016

新虫 (初入文坛)

一般情况下沉淀核酸PEI的使用浓度是多少?
go ahead show your wild side
4楼2012-12-15 10:57:37
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